04 NK活性测定.pptxVIP

淋巴细胞功能测定;淋巴细胞功能测定的体外试验;T细胞功能检测 T细胞亚群的检测 IL-2活性的测定 淋巴细胞转化实验 B细胞功能检测 抗体形成细胞检测（溶血空斑试验） EA花环试验（测定Fc受体） SmIg的测定（直接免疫荧光法） NK细胞活性检测（细胞毒试验） 吞噬细胞功能检测;NK活性测定; 属淋巴细胞；无特异性TCR；无须致敏即直接杀伤靶细胞。 表面标记 CD3-、CD56+、CD16+ 表面受体 （1）杀伤细胞活化受体（KAR） 结合靶细胞表面糖类配体，促使NK发挥杀伤作用。 （2）杀伤细胞抑制受体（KIR） 识别自身细胞表面MHC-I类分子，产生抑制信号。 主要生物学功能 抗感染与抗肿瘤；免疫调节;;; NK细胞通过ADCC作用杀伤病毒感染的靶细胞;NK细胞杀伤靶细胞电镜图;胞 核 125I释放法 荧光染料释放法;实验原理;实验材料;NBT（硝基氯化四氮唑蓝） 4mg NAD+（氧化型辅酶I ） 10mg PMS（吩嗪二甲酯硫酸盐） 1mg;实验步骤; 取培养24~48hr的靶细胞(K562), 洗涤3次（1000rpm×10min）, 最后用完全RPMI-1640培养液调整细胞浓度至1×105/ml, 备用。;效应细胞的制备 （外周血单个核细胞分离）;密度梯度离心分离外周血单核细胞;用完全RPMI-1640定容细胞，计数后调整细胞浓度 （加入0.2ml完全RPMI-1640 ，混匀）;效-靶细胞作用;;酶促反应;结果计算;1、无论采用何种试验方法, 靶细胞的质量是影响细 胞标记率、自然释放率及实验稳定性的重要因 素。一般要求靶细胞的自然释放率10％。 2、分离PBMC时，应用毛细吸管尽可能吸取灰白 层，切勿搅动各层。 3、吸取细胞培养上清时, 应尽可能不吸动沉淀的细 胞。 4、用此法测得NK活性的正常值范围在10-40%。