2.菌种选育.pptxVIP

2 菌种的来源，生物活性物质的筛选和菌种的保藏;菌种是发酵工业的基础，是发酵工业的关键。 获得微生物和新产物，关键是： ①、选择合适的微生物源； ②、建立科学的筛选方案(检测系统)。 要求：选择性强、灵敏度高。; 微生物是各种活性产物的源泉，资源丰富。 医药50％的化合物与天然产物有关。 微生物菌种资源开发和利用的前景十分广阔。;一、工业生产常用的微生物及要求 （一）微生物的特点;最常用的工业微生物;最常用的工业微生物;霉菌 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 根霉属 德氏根霉 米根霉、小麦曲根霉 红曲霉属 紫红曲霉;最常用的工业微生物; 未培养微生物;二、发酵工业菌种分离筛选原则与基本技术; 1. 菌种选择的总趋势; 2. 菌种选择的要求 ;（二）分离筛选原理与技术;1. 筛选的两种指导思想 ;2. 分离筛选工作在实际中应用的几个方面;设计筛选方案时必须考虑两个要点 ;3. 新种分离与筛选的步骤 ;3. 新种分离与筛选的步骤 ; 选择性分离方法大致可分为五个步骤（放线菌的分离为例）：;1. 含微生物材料的选择;菌种来源选择标准： 1、土壤来源广泛：天然材料（土壤等）来源越广泛，含有目的菌的可能性越大，获得新菌种的可能性越高； 2、在已适应相当苛刻环境压力的微生物类群中寻找新菌种。 例：从被污染的实验室培养基中分离出嗜盐菌，从盐场分离出嗜盐链霉菌。 ; 3、利用同一生态环境内的不同环境条件分离出更多种类的菌株。 例如：酸性土壤圈的放线菌类群与其紧接下层的中性圈的放线菌类群有很大不同。 4、自然环境的菌群可因人类的活动而改变。 例如：于土壤中加入去莠津会导致放线菌菌群数量的增加。如诺卡氏菌属能生长在Carboxanilide杀真菌剂中。 5、更新的生态环境仍有待开发。 例如，从Componia的根瘤中分离出一株放线菌；从白蚁肠子里分离出一株类似放线菌的细菌。;2. 样品的预处理;材料的预处理;（1）、物理法 ①、热处理：可减少材料中的细菌数。因许多放线菌比细菌细胞耐热。 ???、膜过滤：样品中细胞数较少时(如水)，可采用膜滤法浓缩。滤膜的品种对收集菌的类型有重要的影响。 ③、离心法：处理放线菌繁殖体含量很低的海水，可先将样品离心后再过滤。; ④、搅动释放孢子法：收集腐烂稻草和其他植物材料中的嗜热放线菌孢子可在空气搅动下进行。并可用一风筒或一简单的沉淀室收集孢子。然后，用取样器将空气撞击在含培养基的平板上。这样可以减少分离平板中的细菌数目。 ;（2）化学法 在分离前加一些固体基质(把几种基质加在土壤中)或洒些可溶性养分来强化培养基。 加几丁质或碳酸钙、提高pH;（3）诱饵技术 将固体基质加到待检的土壤或水中，待其菌落长成后再铺平板。 如：花粉、蛇皮、人的头发、涂石蜡的棒;分离方法的选择; 选择性分离原理和技术;所需菌种的分离取决于分离培养基的养分、pH值和加入的选择性抑制剂。 一般凭经验而不是绝对的选择。;1、选择合适分离培养基; ①、几丁质培养基： 分离土壤和水中放线菌。 但测试过的500株链霉菌和其他放线菌中，只有25％的菌种具有强的水解几丁质的能力。 许多放线菌生长在能利用几丁质的可作为放线菌碳与氮源的“食腐菌”上，而其本身却不利用几丁质。; ②、淀粉-酪素培养基： 长出的放线菌种类与几丁质培养基上生长的相似，但其菌落的密度更大、色素更多，同时细菌也容易生长。 这种培养基中加入4.6％(m/m)的NaCl，有利于链霉菌生长，但不是所有的链霉菌都能耐受这一浓度的NaCl。; 大多数放线菌都是嗜中性的，分离培养基的pH通常在6.7～7.5之间。 分离嗜酸放线菌，宜 pH 4.5～5.0。 有人从碱性的加拿大土壤中分离出嗜碱链霉菌，不能在pH6.1～6.8下生长。估计嗜碱性放线菌也可能存在于其他碱性环境中。;3、加入选择性抑制剂; 筛选放线菌时，可加入抗真菌抗生素，但不能用抗细菌抗生素，因放线菌对它敏感。 如分离种类较广的放线菌，在分离培养基中加抗细菌抗生素时会使得放线菌及其细菌的数量同时减少，但如果分离的种类不那么广，可加入放线菌能耐受的抗生素，如培养基中加入新生霉素(25μg/mL)和亚胺环己酮(50 μg/mL)能分离出普通高温放线菌。; 温度和时间两方面，主要变量为时间。