Genome-CRISPCRISPR-Cas9产品与服务.PDF

Genome-CRISP™ CRISPR-Cas9 产品 及服务 用户手册 广州高新技术产业开发区 广州科学城掬泉路3号 广州国际企业孵化器F区8楼 510663 电话: 4006-020-200；020 传真: 020 网址: © 2016 GeneCopoeia, Inc. Genome-CRISP™ CRISPR-Cas9 产品和服务 用户手册 Genome-TALER™ CRISPR-Cas9 产品和服务 I.CRISPR-Cas9技术简介 II.相关服务 III.CRISPR-Cas9 基因组编辑流程概览 IV.关键步骤 V.参考文献 VI.附录 A . 克隆产品及服务 B. 其他产品及服务 VII.使用许可及质保声明 I. 技术简介 CRISPR-Cas9体系技术背景 CRISPR-Cas系统 （clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats-associated protein systems ）是细菌及古细菌进化出来用以抵御病毒和质粒入侵的适应性机制。CRISPR-Cas系统的高 效基因组编辑功能已被应用于多种生物，包括斑马鱼、小鼠、大鼠、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。 多个科研小组的研究都显示，与锌指核酸酶 （Z FNs ）和转录激活样效应核酸酶 （T ranscript io n activator-like effector nucleases, TALEN）相比较，CRISPR-Cas系统介导的基因组靶向实验在细胞 或斑马鱼中显示出相似甚至更高的效率。 高效灵活的基因靶向操作 在CRISPR-Cas9系统中，CRISPR RNA （crRNA ）与转录激活crRNA （Trans-activating crRNA , tracrRNA ）退火形成的复合物能特异识别基因组序列，并引导Cas9核酸内切酶在靶生成DNA双链断 裂 （DSB ），诱导基因敲除、基因敲入 （配合供体克隆）、序列修饰等基因组编辑操作。识别复合 体可以通过融合crRNA与tracrRNA形成sgRNA （single-guided RNA ）进行简化。基因组靶点序列上 上长有约20bp与sgRNA识别区序列一致。该序列末端紧接着三核苷酸区域PAM （5 ’-NGG-3 ’）为 Cas9识别位点，是实现剪切功能的关键。 sgRNA识别并结合该序列的互补链；随后Cas9核酸酶剪 切被识别的靶点DNA双链。 CRISPR-Cas9体系的RNA-DNA识别机制为选择性基因组编辑提供了一个简便而强大的工具。该体 系其中一个最重要的优势是Cas9蛋白可在多个不同的sgRNA 的引导下同时修饰多个基因组靶点。 优势 RNA导向的基因组DNA特异识别，无需考虑DNA 甲基化 设计简单快速，无需重复构建核酸内切酶t 较ZFN和TALEN，有相同或更高的基因编辑效率 灵活高效的多重靶向编辑设计，可同时编辑多个基因 Genome-CRISP™ CRISPR-Cas9 产品和服务 图 1. CRISPR-Cas9介导基因组编辑原理图 图 2. sgRNA介导的基因组编辑。左图： sgRNA 引导Cas9核酸酶生成DSB，诱发NHEJ修复；右图： 通过HR反应利用供体质粒在基因组序列上插入目的基因及筛选标记 （或其他遗传因子），修复DSB。 Genome-CRISP™ CRISPR-Cas9 产品和服务 II.相关服务 服务 描述 染色体水平功能验证。通过检测CRISPR-Cas9介导的非 验证服务 错配酶切检测 同源末端连接 （NHEJ ）在染色体靶点上生成的插入缺 失突变验证其功能。 我们会依据您的实验需求，提供供体克隆客户定制服务。