植物胚胎培养和离体授粉.ppt

种子的来源 种子的来源 种子的结构 一、胚乳的发育（初生胚乳核 胚乳） （一）核型胚乳： 初生胚乳核 核分裂 多数游离核 质分裂 多细胞的胚乳 （二）细胞型胚乳： 初生胚乳核 核分裂、质分裂 多细胞的胚乳 （三）沼生目型胚乳 珠孔室(大) 游离核 胞质分裂多细胞 初生胚乳核第一次分裂胚囊分成 合点室(小) 游离核 再生植株的染色体倍数 1、稳定型 继代培养后染色体无变化，植株三倍体 2、畸变型 细胞染色体异常，植株为多倍体，且不一致， 形成多种倍性细胞组成的嵌合体。 四、离体授粉 在无菌条件下，培养离体的未受精雌蕊或胚珠和花粉，使花粉萌发产生的花粉管进入胚珠，完成受精过程而获得有生活力种子的技术。 D、天然提取物及某些蛋白制品的作用 银杏幼胚培养中添加银杏胚乳有促进作用（李继侗，1934）； 曼佗罗幼胚培养中发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发育(200-500um的幼胚) （1941）。 此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的发育。 2）胚胎发育时期 一般胚龄越小，越难培养； 双子叶植物：心形胚期以后的胚较易培养 禾谷类植物：梨形胚期（受精后8d左右，0.5mm以上）后较易培养 3）培养条件 A、温度：多数为25-30℃，以该植物种子萌发的适宜温度为好。 B、光照：大多数处于球形期至心形期的幼胚,需要在黑暗条件下培养两周后再给予光照,早期光照不利于胚根发育,但胚芽发育需要光照. C、pH ：不同种类植物和不同发育时期的幼胚对pH的要求不同。 例：荠菜胚的培养过程 双子叶植物（球形胚晚期以及更大的荠菜胚）的培养： 消过毒的荠菜蒴果放在几滴无菌培养基中 ?用镊子将蒴果外壁的两半撑开，露出胚珠 ?解剖镜下可见胚珠中绿色的鱼雷形或更幼龄胚 ?由胎座上取下一个胚珠，放在凹玻片中（内有一滴培养基） ?用锋利的有柄刀片将胚珠纵切成两半 ?留下有胚的一半，仔细剔除胚珠组织 ?取出连着胚柄的完整胚（较老胚在胚珠上无胚的一侧切一小口，用钝头解剖针轻压珠被） ?把完整的胚挤出到周围的液体中 ?接种到培养基上 ?暗培养幼胚发育到鱼雷形阶段 ?转移到降低蔗糖浓度（2~3%）的同样培养基上 ?光培养至发育成熟 ?新的植株 3、植物胚胎培养的应用 远源杂交中克服杂种不育（胚胎拯救） 杂种胚一般生活力低下，发育不良，通常不育，利用胚胎培养就能得到杂种后代，从而选育出优良品种 促进无生活力或生活力低下的种子萌发 长期营养繁殖的植物，种子可能无生活力或生活力低下，利用胚胎培养有可能促进这类种子萌发和形成幼苗 缩短育种周期 有些植物种子的休眠期很长，通过离体培养，可以使休眠期缩短或打破休眠 理论研究 利用胚胎培养方法，可以对整个胚及胚各个部分的再生潜力、影响胚胎发育的因素、器官发育过程、胚与胚乳的关系等相关问题展开研究 单倍体产生：大麦×球茎大麦，小麦×玉米 二、胚珠和子房培养 （一）胚珠培养 1、材料的选择和灭菌： 未授粉胚珠：开花前1-6天， 授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚时期有利于胚的发育。 灭菌：先对子房或外表组织 消毒灭菌后，后取出胚珠培养 （可带胎座组织一起取出）。 2、接种培养 （二） 子房培养 1、子房培养包括授粉前和授粉后的子房培养。 2、未授粉子房培养应注意的问题： 材料的选择：开花前1-5天的花蕾，发育时期（接近成熟胚囊易于成功）；可部分保留花被。 培养基：基本培养基（MS、N6、B5等）、植物激素（配合使用）、蔗糖浓度（3-10%） 培养方式：直插优于平放。 （二） 子房培养 3、子房培养物的倍性： 二倍体：来源于合子（受精后）或体细胞 三倍体：来源于胚乳（受精后） 单倍体：来源于未受精的胚囊内的细胞（卵细胞、助细胞、反足细胞、极核细胞） Wendel et al. 2003 Genome doubling has led to an array of molecular genetic interactions, including inter-locus concerted evolution, differential rates of genomic evolution, inter- genomic genetic transfer, and probable alterations in gene expression. Rapp et al. 2010 Much of our current