2-ΔCT(试剂盒说明书).pdfVIP

荧光定量 PCR 基因表达检测试剂盒 说明书(通用版) 前言 随着荧光定量PCR技术的成熟和荧光定量PCR仪的普及，用传统的半定量方法检测目的基因 表达量的升高或者降低，已经远远不能满足当前科研的需要，针对当前研究的热点基因，闪晶生 物及时地从美国biosuper公司引进不同物种、不同基因的荧光定量PCR检测试剂盒。该试剂盒包含 了目的基因和管家基因的引物、taqman探针(荧光探针) 、反转录试剂、荧光定量PCR试剂、操作 说明书等，用户只需将提好的RNA加入就可以进行荧光定量PCR实验，操作方便简单、适合多种 荧光定量PCR仪，同时也避免了自己设计、合成引物探针的烦恼。 基本原理 先用随机引物将 RNA 反转录成 cDNA，然后设计特异性的引物和荧光探针(TaqMan 探针),进行 荧光定量 PCR 检测。TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它设计为与目标序列上游引物和下游引物 之间的序列配对。荧光基团连接在探针的 5’末端，而淬灭剂则在 3’末端。当完整的探针与目 标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与 3’端的淬灭剂接近而被淬灭，但在进行延伸反应时， qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离,荧光强度得到检测。 随着扩增循环数的增