玉米原位转化体系建立及转化机制初步分析.pdfVIP

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2017-06-09 发布于上海
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玉米原位转化体系建立及转化机制初步分析.pdf

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玉米原位转化体系建立及转化机制初步分析论文

bottom showed that transformed cases occurred in the begining of flowering. The conversion rate can be incresed by early infection.These results provided experimental basis that is very important for the method of in planta transformation of Maize. Key words:Maize;Orthogonal design;In plant transformation;GUS staining III 目录摘要I AbstractII 目录IV 1 文献综述 1 1.1玉米转基因研究的意义 1 1.2 玉米转基因研究现状 1 1.2.1玉米转基因方法 2 1.2.2 玉米转基因受体系统4 1.3农杆菌介导的原位转化研究进展5 1.3.1植物原位转基因方法的提出与发展5 1.3.2 影响转化相关条件的研究6 1.3.3转化机理的研究 8 1.4 原位转化方法的优势9 2 引言10 3材料与方法11 3.1实验材料 11 3.1.1植物材料11 3.1.2 菌株与载体11 3.1.3 各种酶及试剂 11 3.1.4 仪器设备 12 3.2 农杆菌活化培养及菌液的制备 12 3.2.1培养基种类和成分 12 3.2.2 农杆菌的培养 12 3.2.3转化缓冲液的制备 12 3.3 正交试验设计 12 3.4 原位转化及田间管理 13 3.5转基因植株的获得 13 3.5.1除草剂筛选浓度的确定 13 3.5.2T 转基因植株的筛选 14 0 3.5.3抗性植株的 PCR检测 14 3.6 转化结果的数据统计 15 IV 3.7 转化机制的研究 16 3.7.1浸花法转化玉米雌花序 16 3.7.2 取样方式 16 3.7.3GUS染色分析 16 3.7.4 结果统计 16 4 结果与分析18 4.1玉米原位转化体系的建立 18 4.1.1原位转化 18 4.1.2 除草剂筛选浓度的确定 18 4.1.3 T 代种子的抗性筛选 19 0 4.1.4 转基因植株的分子检测 19 4.1.5雌花序的原位转化技术体系20 4.2 转化参数优化分析 21 4.2.1 不同因素水平下烂穗率比较21 4.2.2 玉米结实率影响因素分析22 4.2.3 不同因素水平对转化率的影响 24 4.3 转化机制分析25 4.3.1 农杆菌进入受体植株的侵染路径观察26 4.3.2GUS 阳性率与小花位置的关系30 5讨论 31 5.1菌液浓度对转化结果的影响 31 5.2Silwet L77对转化结果的影响31 5.3蔗糖浓度对转化结果的影响 31 5.4 大田环境对玉米转化结果的影响32 5.5农杆菌在玉米原位转化中的侵染路径32 5.6雌花序不同位置子房中 GUS 阳性率32 6 结论34 参考文献 35 致谢 42 作者简介 43 V