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三七的 18S rRNA, matK 基因序列和 HPLC 化学指纹图谱分析研究* 张英1 黄明辉2 柏干荣2 杨梦苏2 曹晖1 3 1 中国中医研究院中药研究所 北京100700 2 香港城市大学生物及化学系 香港特别行政区 3 国家中药现代化工程技术研究中心 广东珠海519020 摘 要 目的:分析名贵中药三七Panax notoginseng 的18S rRNA和matK 基因的分子特征和三七的化学指纹特 征 为三七的正品药材基原鉴定提供分子和化学依据 方法: 采用PCR 直接测序技术测定三七及其7 种伪品 的18S rRNA 和matK 基因部分核苷酸序列以及不同产地三七的DNA 分子特征 利用HPLC 的化学分析技术 明确产地对三七化学成分的影响 以及三七不同部位的化学指纹特征 结果: 1 三七及其7 种常见伪品的核 糖体18S rRNA基因序列存在很大的差异 2 不同产地的三七的核糖体18S rRNA和叶绿体matK 基因序列 特征完全一致 分别与GenBank 上已报道的R1 型(D85171)和M1 型(AB027526)序列吻合 3 不同产地的三 七HPLC 指纹图谱相似 4 三七不同部位均具有其相对稳定的指纹特征 其中花 叶具有特有的指纹区 根 须根 剪口 筋条等不同商品规格的指纹图谱比较相似 结论: 基因序列标记能从分子水平定性分辨三七及 其伪品的遗传背景差异 为中药品种标准化提供了先进可行 稳定可靠的分子标准 HPLC 指纹图谱分析可 以直观地为三七的化学成分定性 三七不同商品规格的特征性指纹有望成为以其为原材料的各种产品的质控 标准 而三七不同部位 尤其是花和叶 的指纹图谱将有望成为制定三七花 三七叶新药用资源质控标准的 依据 关键词 三七 Panax notoginseng 基因分析 指纹图谱 中药鉴别 三七Panax notoginseng (Burk.) F.H. Chen 是五加科人参属植物 始载于 本草纲目 是活血止血要药 民间有“人参补气第一 三七补血第一” 的说法 三七的生长受气候和地理的影响 分布范围较集中 主产于 云南文山州文山 砚山 马关三县 广西靖西县也有少量栽培 据报道广东南雄也有引种栽培 虽然三七的 种植已趋于基地化和规范化 但药材市场上或各地仍存在以其它科属植物混充或代替三七药用的现象 如五 加科的竹节参 珠子参 屏边三七 姜状三七 姜科的姜黄 莪术 郁金 姜三七 景天科的垂盆草 佛甲 草 菊科的菊叶三七 兰科的白及等 因其外形或功效相似 常被混作三七使用 近年来 国内外已采用PCR *珠海市科技局科技计划重大项目 2002-2-14 国家 863 计划 功能基因组与基因芯片 重大专项 2003AA2Z2052 1 直接测序技术对三七及其人参属和姜黄属混 伪品核基因组的 18S rRNA 基因片段进行核苷酸序列测定和分 析 以进一步明确三七正品基原的DNA 分子特征(1-3) 日本伏见裕利等对不同产地的三七的matK 基因和18S rRNA 基因进行测序分析研究发现 日本市场 广西产 与云南产三七样本间的18S rRNA和matK 基因序列 存在2 个基因型R1M1 和R2M2 推断三七基因序列可能具有遗传异质性 genetic heterogeneity 的特点(4) 对三七的HPLC 指纹图谱研究也有许多报道 5-10 对不同产地 不同采收季节 不同生长年限 不同 海拔 不同规格的35 个三七样品, 以人参皂苷Rg1 人参皂苷Rb1 人参皂苷Re 人参皂苷Rd 及三七皂苷 R1 为对照品的HPLC 色谱 确定 15 个共有峰 研究结果表明 同一产地的样品主要成分指纹峰有较好的相 似性 同一栽培