阿维链霉菌中转录因子AveR对阿维菌素生物合成的正调节_朱冬青.pdfVIP

42 9 上 海 交 通 大 学 学 报 Vol. 42 No. 9 2008 9 JOU RNAL OF SH ANGHAI JIAOT ONG UNIVERSITY Sep. 2008 : 1006-2467( 2008) 09- 1448-0 AveR 朱冬青, 何云龙, 白林泉, 邓子新 ( , 200030) : av eR 是阿维链霉菌NRRL 816 阿维菌素生物合成基 簇中唯一可能的调节基 . 为了 验证av eR 是否参与阿维菌素生物合成基 的转录调节, 构建了用于敲除av eR 的基 置换质粒 S R pJTU2 30, 并通过接合转移引入了阿维链霉菌. 通过筛选T hio Apr 转化子, 经聚合酶链式反应 ( PCR) 扩增验证, 获得了av eR 内部1 320 bp 区域被阿泊拉霉素抗性基 aac ( 3) I V 替换的突变株 ZD10. 高压液相色谱检测表明, 与野生型菌株相比, 突变株ZD10 不再产生阿维菌素, 并且ZD10 中 寡霉素的产量明显高于野生型菌株. 进一步的反转录PCR( RT-PCR) 分析表明, 与野生型菌株相 比, 突变株ZD 10 的聚酮合酶基 av eA 3 不再转录. 结果显示, AveR 是阿维菌素生物合成的正调 节 子, 通过调节结构基 的转录表达来影响阿维菌素的产生. : 阿维链霉菌; 阿维菌素; 调节; 寡霉素 : Q 939. 94 : A Posit ive Regulat ion of Avermectin Biosynt hesis by AveR in Streptomyces avermitilis ZH U D ong-qing , H E Yun- long , B A I L in-quan , D E N G Zi-x in ( Key Laboration for M icrobial M etabolism of M inistry of Education, Shanghai Jiaotong U niversity , Shanghai 200030, China) Abstract: Gene av eR is the only putative regulatory gene in avermectin biosynthetic gene cluster from S r ep omy ces av erm i il is NRRL816 . In order to test if av eR is involved in the regulation of transcription of avermectin biosynthetic genes, plasmid pJT U2 30 w as constructed and introduced into S . av er mi ilis by conjugation. T he av eR mutant ZD10, in which a 1320 bp internal fragment of av eR is replaced by aac ( 3) I V, w as obtained and confirmed through PCR amplification. Analyzed by LC-M S, avermectin produc- tivity w as abolished, w hereas the yield of oligomycin significantly increased in ZD10. The r