几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较.pdfVIP

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2017-06-09 发布于河南
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几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较.pdf

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几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较

25 () Vol1 25 2 Journal ofH ubeiNorm alUn iversity ( N atu ral Science) No12, 2005 DNA 王友如, 胡莎, 崔永涛 (湖北师范学院生物系, 湖北黄石 4 5002) : 常规的农杆菌质粒 DNA 提取常采用碱裂解和酚氯仿提纯法, 得率较低, 一般在 50ng/uL以下就经典的碱裂解法 ( 法一)和在碱裂解法的基础上改进的法二(去除了酚氯仿提取过程, 减少了提取过程中对人的伤害, 且缩短了提取时间)以及改进的法三进行了比较, 实验结果表明: 改进的法二更适宜于做 PCR检测, 而法三则适合于重组质粒 DNA 的酶切PCR鉴定等 : 农杆菌; 质粒 DNA 提取; 法比较 : Q812 : A : 1009-2714( 2005) 02- 0070- 0 0 DNA, , DNA , [ 1] , , DNA , PCR 1 1. 1 YEB : : 5 g, 5 g, MgSO # 7H O 0. 5 g, 4 2 1 g, 5 mol/L N aOH pH 7. 0, ( 15 g/L 1. 5 % ), 2 5 15 bf/ in ( 1. 0 4 @ 10 Pa) 20 m in; Solution : 50 mmol/L , 25 mmol/L T ris@ C l ( pH 8. 0), 10mmol/L EDTA ( pH8. 0); Solution : 0. 2 mol/L N aOH, 1% SDS, (, ); Solution : 100 mL: 5M KAC 60. 0 mL, 11. 5 mL, 28. 5 mL; TE Buffer: 10 mm l/oL T ris@ Cl ( pH8. 0), 1mmol/L EDTA ( pH8. 0); STE: 0. 1 mol/ L N aCl, 10 mmol/ L T ris pH8. 0, 1mmol/ L EDTA pH 8. 0; M arkerH indIIITaq PoLymerase, PCR ; PCR[ 2] 1. 2 LBA 4404, pGBI1214ASVHB(H indIII, 1. 6KbVHB, kana) : 2004) 10) 19 : ( 1972) ), , , , # 70# 2 2. 1 LBA44045 mL YEB( 100 mg/mL) , 28 e , 250 rpm ; 2 mL 50 mL YEB, OD 0. 6; , 0 m in, 5000 rpm 5 m in; 1. 7mL 20 mmoL /L CaCl , 00 2 mL, , 200 mL 1. 5 mL, - 70e 2. 2 DNA LBA4404 200 mL LBA4404 2 mgDNA, 5 m in, 8m in; 7e 5 m in, 800mL YEB; 28e 250 rpm 4h~ 5h; YEB, 28e 24h~ 48h 2. 3 DNA 2. . 1 法一 1) YEB, 28e , 250 rpm 20 h; 2) 5 mL 1. 5m L, 4 e , 12000 rpm 0 s, 1. 5 mL; )