纳豆激酶基因的克隆和高效表达.PDFVIP

安徽农业大学学报, 2012, 39(4): 556-559 Journal of Anhui Agricultural University 网络出版时间：2012-7-4 17:47:40 [URL] /kcms/detail/34.1162.S1747.019.html 纳豆激酶基因的克隆和高效表达 王 伟，甘 露，甘旭华，陈晓琳，倪敬田，唐欣昀* (安徽农业大学生命科学学院，合肥 230036) 摘 要：为了克隆纳豆激酶(Nattokinase ，NK)基因，实现纳豆激酶在大肠杆菌中的表达，并对其表达条件进行 研究，首先以从枯草芽孢杆菌中提取的基因组 DNA 为模板，通过 PCR 扩增包括信号肽、前导肽、成熟肽序列的 前纳豆激酶原基因，将其克隆到载体 pET28a 中，构建重组质粒pET28a-NK ，成功转化大肠杆菌BL21(DE3)；然后 优化影响该基因表达的温度、时间和 IPTG 添加量等因素。结果表明，重组菌株 BL21(DE3)-NK 在 20 ℃下培养、IPTG 添加量为 0.4 mmol·L-1 、培养20