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红细胞膜磷脂水平及急性缺血性卒中关系 　　[摘要] 目的 该文采用高效液相色谱技术，对急性缺血性卒中患者红细胞膜磷脂含量分析，探讨红细胞膜磷脂水平在急性缺血性卒中发生、发展中的作用机制。方法 采用流行病学横断面调查方法，自2015年7―10月筛选病例组人群22例，健康对照组人群24名，分离红细胞膜，用HPLC，XBP-Silica柱分离，测定两组人群红细胞膜磷脂含量，数据采用SPSS 20.0统计学软件分析。结果 5种磷脂中脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰丝氨酸（PS）3种磷脂病例组含量（0.3796±0.1387）、（0.4498±0.1786）、（0.3301±0.0327）与对照组（0.4897±0.0154）、（0.5523±0.0107）、（0.6351±0.0599）数值差异有统计学意义（P0.05）。 结论 红细胞膜磷脂水平参与影响了急性缺血性卒中的发生发展过程，可能是急性缺血性卒中发生发展的一个诱导机制 [关键词] 急性缺血性卒中；红细胞膜；磷脂 [中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）12（a）-0031-04 脑卒中是一种高发病率、高致残率、高死亡率的疾病。而缺血性卒中在我国约占卒中总数的70%[1]。大量研究发现急性缺血性卒中患者存在红细胞膜脂质成分的改变，但对红细胞膜磷脂含量的变化，结论不一。组成细胞膜的磷脂主要包括磷酯酰丝氨酸（PS）、磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰肌醇（PI）、磷脂酰乙醇胺（PE）、神经鞘磷脂（SM）等，这些磷脂在血细胞膜上的含量远远大于血清中的含量。因此该文采用高效液相色谱（HPLC）技术高效液相色谱法自2015年7―10月对筛选病例组人群22例，健康对照组人群24名患者血清中 5 种磷脂磷脂含量水平分析，从而探讨红细胞膜磷脂水平与急性缺血性卒中的关系 1 材料与方法 1.1 主要仪器和试剂 高效液相色谱（Agilent 1260），超声波清洗器（ KQ-100DB），超纯水仪（Millipore美国），分析天平（AR1140，美国）。磷脂酰丝氨酸标准品（PS 90%） 、磷脂酰胆碱标准品（PC 98%） 、磷脂酰肌醇标准品（PI 98%） 、磷脂酰乙醇胺标准品（PE 98%）、神经鞘磷脂标准品（SM 98%） 均购自瑞典Larodan 公司；乙腈、甲醇、磷酸、氯仿、己烷、异丙醇（ 天津市光复精细化工研究所） 1.2 调查对象收集与筛选 该研究对象来自黑龙江省林总医院自2015年7―10月住院的急性缺血性卒中患者，年龄在60～75岁之间，共计22例（男12例/女10例），排除冠心病、糖尿病及其他具有精神疾病者等，作为病例组。对照组在哈尔滨第二福利医院健康老年人中选取，年龄与病例组相匹配，共计24人（男12/女12）。所有研究对象均由本人或监护人签署知情伦理同意书，自愿参加和退出，自愿接受问卷调查和实验室检查 1.3 红细胞膜中磷脂的提取 取受试对象晨起空腹肘静脉血，经低温离心、洗涤、沉淀等处理，获得白色的红细胞膜样品。然后，取红细胞膜悬浮液加入0.5 mL的提取液[氯仿-甲醇（体积比2：1）]，冰浴匀浆3 min。加入提取液4 mL，于30℃保温30 min，以3 000 r/min离心5 min，取下层液过滤除蛋白。滤液加0.9%Nacl 0.4 mL，振摇1 min，以3 000 r/min离心5 min，弃上层液。加0.4 mL氯仿-甲醇-水（体积比8：4：3）振摇、静置，以3 000 r/min离心5 min，弃上层液，氮气吹干。残渣用 2 mL 正己烷-异丙醇（3∶1） 溶解，经有机滤膜过滤于样品瓶，备用 1.4 色谱条件 流动相为乙腈：甲醇：85%磷酸（体积比为100：10：1.8）。色谱分析柱以XBP-Silica （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相检测波长为203 nm，进样量10 μL，柱温25℃，流速1.5 μL/min 1.5 样品测定 取处理完成的红细胞膜磷脂提取物，在上诉色谱条件下，取10 μL进样分析，同时绘制标准曲线，采用外标法定量，相对保留时间定性。标准色谱图和样品图见图1 1.6 统计方法 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据统计分析，计量资料以均值±标准差（x±s）表示，组间资料比较采用ANOVA检验， P 　　表3列出了病例组组与对照组红细胞膜中5种磷脂的测定结果，从中可见磷酯酰丝氨酸（PS）、磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）的含量差异有统计学意义（PS：P0.05 为衡量脂质过氧化程度，比较细胞膜成分变化，我们将甘油磷脂与神经鞘磷脂做比率，结果如表4所示。PI/SM的比值在