品红亚硫酸钠培养基.docVIP

　　编号：022150 　　中文名称： 品红亚硫酸钠培养基(远藤琼脂培养基) 　　英文名称:Endo Agar 　　用 途： 　　用于水中大肠菌群的分离或确证试验。 (GB/T8538-2008和GB5750.12—2006)。 　　原 理： 乳糖发酵的细菌产生乙醛，在存在碱性品红的情况下乙醛与亚硫酸钠结合形成红色菌落，快速发酵乳糖的细菌产生金属光泽，不发酵乳糖的细菌形成无色透明的菌落。蛋白胨、酵母膏粉、牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和矿物质;乳糖为可发酵的糖类;琼脂是培养基的凝固剂;磷酸氢二钾为缓冲剂;亚硫酸钠能将碱性品红还原，使其褪色，发酵乳糖的细菌产生乙醛，与亚硫酸钠和碱性品红生成红色菌落。　　配方(每升)： 　　蛋白胨10g 　　酵母膏粉5g 　　牛肉膏粉5g 　　乳糖10g 　　琼脂15g 　　磷酸氢二钾3.5g 　　无水亚硫酸钠5g 　　碱性品红 1g 　　最终pH 7.2±0.2 　　使用方法： 　　1、 称取本品54.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，115℃高压灭菌20min，冷至50℃左右，倾注无菌平皿，备用。 　　2、 滤膜灭菌：将孔径为0.45μm的滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水或去离子水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。 　　3、 滤器灭菌：用点燃的酒精棉球，火焰灭菌。也可用121℃高压灭菌20min。 　　4、 过滤水样：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL水样(如水样含菌较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，负0.5大气压下抽滤。 　　5、 培养：水样抽滤完后，再抽气约5S，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入36±1℃恒温箱内培养22-24h。 　　6、 观察结果：挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。 　　紫红色，具有金属光泽的菌落。 　　深红色，不带或略带金属光泽的菌落。 　　淡红色，中心色较深的菌落。 　　质量控制： 　　本培养基倾注平皿待冷却后呈浅红色。质控菌株接种后。36±1℃培养22—24h， 观察结果如下表： 　　菌 名 　　　　　　菌 号　　　　　生长状况　　　　菌落特征 　　大肠埃希氏菌　　ATCC25922　　 　　良好　　　　红色，有金属光泽 　　鼠伤寒沙门氏菌　CMCC(B)50115　　　良好　　　　无色至淡粉红色 　　金黄色葡萄球菌　ATCC6538 　　　　 不长或差 　　　　—— 　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。 　　规格：250g