易脆毛霉多糖对烟草幼苗促生效果及烟草花叶病毒抑制作用.docVIP

易脆毛霉多糖对烟草幼苗促生效果及烟草花叶病毒抑制作用 　　摘要：为了解易脆毛霉多糖的抗病促生效果，本研究采用盆栽试验和半叶枯斑法测定了该多糖处理对烟苗生长的影响及TMV的抗性。结果表明，多糖处理对烟苗有明显的促生作用，多糖处理烟苗最大叶面积、地上部鲜重、根部鲜重、总叶绿素含量和光合速率均显著增加；多糖处理对TMV的预防效果最好，可达62%，钝化效果次之，治疗效果相对较差，均低于40%。表明，易脆毛霉多糖不仅可以促进烟苗生长，而且对TMV有较好的预防作用，可为今后开发利用该真菌多糖提供参考 关键词：易脆毛霉多糖；促生作用；烟草花叶病毒；抑制作用 中?D分类号：S572.01文献标识号：A文章编号：1001-4942（2017）02-0127-05 真菌多糖是一类天然高分子化合物，广泛存在于真菌特别是大型真菌的细胞壁中，因其具有抗肿瘤、抗病毒[1]和免疫调节[2]等作用而被医药界广泛关注。真菌多糖为β型多糖，常见的有几丁聚糖、氨基寡糖素、菇类蛋白多糖等，许多研究表明，这类多糖不仅具有抑杀真菌、细菌和病毒的作用，而且能够调节作物生长，诱导植物产生抗性[3]。作为天然化合物，真菌多糖还具有无毒、易被降解、对环境无污染等特性，使其有可能作为一种新型植物抗病诱导剂在农业生产中发挥重要作用[4] 病毒病是烟叶生产中最重要的病害之一，常见烟草病毒病包括马铃薯Y病毒、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus， CMV）和烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）等。国内外对烟草病毒病防治做了大量研究，并取得了一些进展[5-7]，但生产上仍缺乏对烟草病毒病的有效控制措施。真菌多糖作为一种新型抗病毒物质越来越受重视，吴艳兵等[8]和罗琰[9]分别研究了毛头鬼伞多糖和香菇多糖的抗病毒作用，发现两种多糖对TMV均有较强的抑制作用。本研究从一株易脆毛霉中提取多糖粗提物，分析该多糖处理对烟苗生长的影响及TMV的室内抑制作用，为易脆毛霉多糖的进一步应用提供参考 1材料与方法 1.1材料 菌株材料：易脆毛霉（Mucor fuagilis）菌株DBJ-1，由山东农业大学分子植物病理学实验室保存；TMV病毒，由山东农业大学刘红梅老师提供 供试烟草品种：烟草品种K326，用于促生作用分析；三生烟（Nicotiana tabacum var. Samsun NN），用于TMV抗性分析 培养基：易脆毛霉培养用PDA培养基；DBJ-1发酵培养用液体培养基，具体配比参照牛小义[4]的方法，组成成分包括冷榨豆饼粉1%，蛋白胨0.2%，葡萄糖3%，MgSO4 0.05%，KH2PO4 0.10%，维生素B1 0.01%，调节pH至5.5 1.2方法 1.2.1多糖提取将DBJ-1接种于PDA培养基，置于28℃恒温箱中培养6～7 d，挑取一环于发酵培养基中，28℃、220 r/min培养7 d，5 000 r/min离心10 min收集菌丝体，无菌水充分洗涤。菌丝体于65℃烘箱烘至恒重，干菌丝在研钵中研细，过80目筛制成干粉。菌丝体干粉加40倍水，80℃水浴浸提2 h，重复两次，合并两次提取液，浓缩至原体积的1/15，缓慢加入3倍体积的95%乙醇，4℃静置过夜，8 000 r/min离心10 min，留取沉淀，沉淀相继以95%乙醇、丙酮洗涤，真空干燥得到多糖 1.2.2多糖含量测定 ① 葡萄糖标准曲线的建立。参照陶美华等[10]的方法 ，准确称取葡萄糖100 mg，用无菌水制成1 mg/mL标准液，备用。分别吸取葡萄糖标准液采用倍比稀释法配置成0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14 mg/mL的葡萄糖溶液。取上述溶液各0.4 mL，加入5%重蒸苯酚0.8 mL，混匀，迅速加入浓硫酸 4 mL，沸水浴加热15 min后，冷却至室温，于490 nm处测定吸光度。以水代替葡萄糖液为空白对照。根据糖浓度及吸光度值绘制回归方程 ②多糖含量的测定。精密称取多糖粉末50 mg，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按照上述方法，测定吸光度，平行测定3次，得到3个样品的多糖含量，计算平均值 1.2.3多糖对烟苗的促生作用分析分别配制浓度为0.65 mg/mL和1.30 mg/mL的多糖溶液，选择长势一致的4～5叶期的烟草K326幼苗，将上述多糖溶液均匀喷施于烟叶表面，连续处理3次，每次间隔7 d，于最后一次处理7 d后，检测叶片叶绿素含量、最大叶面积、鲜重等，每处理10 株烟苗。以清水同样处理为对照 1.2.4多糖对烟苗光合作用的影响采用1.2.3的方法处理烟苗，于最后一次处理后7 d测定烟苗的光合速率、蒸腾速率、气孔导度及胞间