金属硫蛋白MT-2a与Cd 和Cu 络合的电喷雾质谱表征.pdfVIP

第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第7期 Chinese of 975～979 2009年7月 Journal AnalyticalChemistry 沈金灿“ 叶卫翔1 康海宁1 葛丽雅1 庄峙厦2 王小如2 1(深圳出入境检验检疫局食品检验与检疫技术中心，深圳518067)2(厦门大学化学化工学院，厦门361005) 量的cd和cu的络合，结果表明，Cd(R)能够优先与MT的a结构域络合，形成M：+s¨结构，并且该络合过程存 在着明显的协同效应；Cd0I)与MT的口结构域的络合形式为孵+s9，其呈现出明显的随机松散络合特性； Cu(1)优先与MT的口结构域络合，其络合形式由Cu,逐渐过渡到更高结合态；在Cu(I)含量较高的条件下， Ca(I)与MT呈现出多种络合方式。 关键词电喷雾质谱，金属硫蛋白，镉离子∞，铜离子(I)，络合作用 1 引 言 金属硫蛋白(metallothionein，MT)的分子量约为6—7 kDa，富含巯基(一SH)基团(每MT分子中的 半胱氨酸约占其氨基酸总量的30％)，不含芳香氨基酸。它是能络合大量金属离子的热稳定蛋白质，具 有广泛的生理功能，如参与微量元素的储存、运输和代谢，对重金属离子的解毒，清除体内自由基 等u．2j。自1957年MT被发现以来，其结构一直是科学家关注的热点。MT具有很强的金属络合能力， 原子呈四面体配位，并通过桥联的硫原子形成M；+s¨和吒+s，两个金属一硫醇簇，相应组成a一和卢．两个 在体外，MT能络合更多的cu+。 在MT与金属的结构研究中，常采用的表征方法有紫外光谱、圆二色谱和NMR等光谱技术【_h9|。 然而，采用光谱技术只能提供MT中形成的金属团簇与巯基的络合性质信息，而不能提供络合量的信 息。电喷雾质谱法(ESI—MS)是一种新的软电离质谱技术，在生命科学领域中得到了广泛应用【l¨“】。 络合信息及其络合的金属的数量的变化o13,14]。 Cd是常见的重金属元素，而Cu是动物体内必需的微量元素，这两种金属均能诱导动物体内产生 毒机理及其与微量元素间的作用。 、 2 实验部分 2．1仪器与试剂 Chemista- 1100型四极杆质谱仪(美国Agilent公司)，蛋白分子量的计算及质谱的解析采用Agilent tion软件。 三羟甲基氨基甲烷(Tris)、醋酸铵、乙酸，均为优级纯(Alfa 中心)；Cu(CH3CN)4PF6(Aldrich公司)。实验用水由Nanopure 制备。所用流动相和溶剂都经氩气脱气除氧，避免MT被氧化。 2008．12-04收稿；2009-03-01接受 本文系国家自然科学基金项目(No和深圳出入境检验检疫局博士资金(No．SZ2007106)资助 $E—mail：jincamh@263．net 976 分析化学 第37卷 2．2样品制备 0。01mol／L Cd(1)溶液；Cu(I)溶解在30％(V／V)乙腈溶液中，其浓度为0．01mol／L。储备液存放于 4℃冰箱，工作液按需要以缓冲液适当稀释。 所用zn诱导兔肝金属硫蛋白(湖南麓谷生物有限公司)，该样品为经排阻色谱分离所得到混合 MT。由于混合MT含有多种MT的亚型异构体，采用混合MT进行实验将使所得质谱结果的谱峰难以 确认和归属，因此先将混合MT通过反相色谱柱进行分离，收集19min洗脱组分。所用色谱柱为Zorbax 300SB mill×2．1 C18柱(150 mm，5 am)(Agilent，USA)，色谱条件为：流速0．25mL／min，流动相 I