2014细胞生物学实验第一次实验课内容(细胞膜的通透性,巨噬细胞吞噬作用的观察).docVIP

实验一 细胞膜的通透性 【实验目的】 了解物质分子质量、脂溶性、电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响。 【实验原理】 细胞膜在不断变化的环境中，必须保持自身的稳恒状态，才能生存。细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻挡另一些物质的通透，所以细胞膜具有选择通透性。水分子可以自由通过细胞膜，当细胞处于低渗液环境时，水分子大量渗入到细胞内，使细胞膨胀，进而破裂，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这就是溶血现象。溶血现象可作为测量物质进人血红细胞速度的一种指标。 红细胞置于乙二醇、丙三醇（甘油）、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中，乙二醇等分子进入血红细胞，使细胞内的渗透性活性分子的浓度大为增加，继而导致水的摄入，细胞膨胀，细胞膜破裂，发生溶血。溶血现象发生的快慢与进入细胞的物质的分子质量大小有关。分子质量大的进入细胞慢，发生溶血所需的时间也长。 非极性化合物易溶于脂溶剂，但在水中溶解度甚小。碳链越长，脂溶性越大。一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中溶解度之比，称为分配系数。 各种非电解质溶液，只要单位体积中所含的分子数相同，就具有相同的渗透压。电解质溶液，如氯化钠与葡萄糖分子数相等时，氯化钠产生的渗透压要大得多。具有相同渗透压的某非电解质溶液与某电解质溶液浓度之比，称为等渗系数，用i来表示。 i=葡萄糖的等渗摩尔浓度/氯化钠的等渗摩尔浓度 发生溶血者为低渗液，所以把发生溶血的前一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗摩尔浓度。 【实验仪器、材料和试剂】 (1) 仪器、用具：小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、注射器、秒表。 (2) 材料：含适量肝素的鸡血。 (3) 试剂：l mol/L乙二醇水溶液，l mol/L丙三醇水溶液，l mol/L 葡萄糖水溶液，3 mol/L甲醇，3 mol/L乙醇，3 mol/L 丙醇，1/8 mol/L、1/9 mol/L、1/10 mol/L、1/12 mol/L、1/14 mol/L葡萄糖溶液， 1/12 mol/L、1/13 mol/L、1/14 mol/L、1/16 mol/L、1/18 mol/L氯化钠溶液。 【方法与步骤】 1. 分子质量大小对细胞膜通透性的影响 （1）在编号的3支试管中，分别用吸管吸入2ml lmol/L乙二醇、lmol/L丙三醇，lmol/L葡萄糖高渗液。 （2）先后分别滴加两滴血液，用手指按住管口，倒置1次。 （3）观察溶血时间，最长延至lOmin。 （4）将实验结果列入如下所示的表格中。 溶液 相对分子质量 溶血时间 1mol/L乙二醇 62 1mol/L丙三醇 92 1mol/L葡萄糖 180 2. 脂溶性大小对细胞膜透性的影响 (1) 编号的3支试管分别加入2m1 3mol/L的甲醇、乙醇、丙醇溶液。 (2) 分别先后加入两滴血液，按住管口倒置1次。 (3) 观察溶血时间。 (4) 将实验结果记入如下所示的表格中。 溶液 相对分子质量 分配系数 溶血时间 3mol/L甲醇 32.04 0.0097 3mol/L乙醇 46.07 0.0357 3mol/L丙醇 58.0 O.156 3. 电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响 (1) 将试管编号，注明溶质名称及摩尔浓度。 (2) 按编号分别加入不同浓度的葡萄糖及氯化钠溶液2ml。 (3) 每管各加入两滴血液，按住管口，倒置一次。 (4) 室温放置15min, 观察发生溶血的浓度，确定等渗浓度。 (5) 按下表记录实验结果。 (6) 计算等渗摩尔系数。 溶液 摩尔浓度 1/8 M 1/9 M 1/10 M 1/12 M 1/13 M 1/14 M 1/16 M 1/18 M 葡萄糖 NaCl 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血，镜检红细胞完好； 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称为不完全溶血，镜检有部分红细胞呈碎片状； 如果试管内液体变红而透明者，称为完全溶血，镜检发现细胞全部呈碎片状。 【讨论】 实验中溶血现象发生的机制是什么？对实验中观察到的现象给出合理的解释。 实验二 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验 【目的要求】 1. 掌握细胞吞噬的实验方法。 2. 了解细胞吞噬实验的研究意义。 【实验原理】 吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞入胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合，将异物消化分解。通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬，计算吞噬百分率和吞噬指数，可以分析判断机体的免疫水平。 【实验用品】 1.