肿瘤的基因治疗.ppt

第三章 肿瘤的基因治疗 一 基因治疗的概念 ◆通过分子生物学的方法将外源治疗基因导入靶细胞 并有效表达，达到治疗疾病的目的。包括以下方式： 基因校正或置换———基因打靶 补赏性基因治疗 非特异性基因治疗： 导入与致病基因无直接关 系的基因如细胞因子基因和自杀基因等 干扰性基因治疗： 如反义核酸治疗，包括反义 RNA/反义DNA，抗核酸，核酶，干扰RNA等。 一 基因治疗的概念 ◆ 第一个基因治疗的例子——伴有酶缺陷的 联合免疫缺陷症（1990，9，14， 9岁女孩） 缺陷基因——腺苷酸脱氨酶（ADA） DNA和 RNA合成异常导 致淋巴细胞特 别是T淋巴细胞受到抑制，引起免疫缺 陷症。 治疗：取出T淋巴细胞——体外培养增殖— ——导入正常的ADA基因并有效表达— ——输回患者体内 二 基因治疗的途径 ◆ 细胞介导的体外基因治疗（ex vivo gene therapy）如上例 ◆ 原位基因治疗（in situ gene therapy）直接向患病部位注射/喷雾治疗基因 ◆ 体内基因治疗（in vivo gene therapy） 关键是建立靶向表达载体和确定基因表达水平。 体外基因的基本程序 ---治疗基因的选择 ---基因载体的选择，包括病毒载体和非病 毒载体两大类 ---靶细胞的选择 ---基因转移， 把治疗基因导入受体细胞的过 程，是基因治疗的一根重要环节 ---外源基因表达的筛选 ---回输患者体内 三 基因转移方法 即把外源治疗基因导入靶细胞并使其有 效表达。 （一）物理化学的方法--------非病毒转移 显微注射法 基因枪———微粒子轰击法 电穿孔法 脂质体法 DNA-磷酸钙共沉淀法 三 基因转移方法 （二）病毒载体转移技术 许多病毒DNA经过适当改造后，可用作载体把外源治疗基因转移到受体细胞，并使之有效表达。 常用的病毒载体有：逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒等 1 逆转录病毒载体 逆转录病毒DNA经适当改造后可作为载体 优点：①转染效率高，可达到100﹪ ②可转导分裂活跃的细胞 ③外源基因可整合到染色体 缺点：①不能转导非分裂细胞 ②导入的外源基因的长度≤8 kb ③有一定的危险性（激活原癌基因、插入突变） 三 基因转移方法 2。 逆转录病毒载体的转移系统一般需要： ①病毒载体——删除了病毒结构蛋白基因，以外源治疗基 因替代，保留了包装序列ψ和两端的LTR调节序列。 ②辅助病毒——含有病毒结构蛋白基因，无包装序列。 ③包装细胞———用病毒载体和辅助病毒共转染包装细胞，病毒载体在细胞中被包装成病毒颗粒，收集假病毒颗粒（？），用其感染其他细胞可以把外源治疗基因转移到其他细胞。 ? 现在腺病毒载体已更多的应用于肿瘤的基因治疗，因 为它安全，可以携带大的外源基因，可以转导分裂 的 或非分裂的细胞。经改进后转染效率已大大提高。 三．基因治疗的策略达到以下三个目的： A 增加机体免疫功能，即杀伤肿瘤细胞的能力 B 抑制癌基因的表达，或导入正常的抑癌基因逆转肿瘤细胞的恶性表型C 增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性， 1．向肿瘤细胞导入细胞因子或其受体基因， 增加机体的局部免疫功能（非特异性基因治疗） 例如：IL-2 TNF-α GM-CSF HLA-B7 HLA-B27等 从而增加： ①促进免疫效应细胞的分化增殖即对肿瘤细胞 的杀伤能力, 如IL-2 ②直接杀伤肿瘤细胞, 如 TNF-α ③增加肿瘤细胞的免疫源性(MHC-1, 如B7等) ④调节其他细胞因子的分泌 2．补替缺陷基因（补赏性基因治疗） 向缺失某种抑癌基因的细胞导入正常的抑癌基因，可逆转其表型，抑制其增殖，诱导其凋亡。 ◆ 例1 用腺病毒载体向小鼠前列腺癌导入治疗 基因P53，2天后细胞开始凋亡，3周后前