白菜β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA的克隆及序列分析.pdfVIP

_______________________________________________________________________________ 白菜β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA 的克隆及序列分析 1,2 1 1 王彦华 侯喜林 ∗ 史公军 1 2 （南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室，南京 210095； 河北农业大学园艺 学院，保定 071001） 摘要：以白菜抗霜霉病品种雪克青 cDNA 为模板，采用 RT-PCR 技术，获得了 1032bp 的β-1,3- 葡聚糖酶基因的 cDNA 序列。序列分析表明，克隆的β-1,3-葡聚糖酶基因 cDNA 序列编码 343 个氨基酸，与芜菁 bg1 基因具有 98%的同源性，与拟南芥 bg2 基因具有 84%的同源性。在 GenBank 中登录号为AY395720。 关键词：不结球白菜；霜霉病；PR 蛋白；β-1,3-葡聚糖酶基因 1 引言 植物在受到病原菌侵染后会积累一些新的蛋白质，被称为病程相关蛋 白 （pathogenesis-related proteins），简称 PR 蛋白。烟草中已报道了 5 大类至少 14 种 PR 蛋白，部分 PR 蛋白性质已经比较清楚。PR-2 蛋白中已经鉴定出4 种血清学相关的 PR 蛋白， 具有β-1,3-葡聚糖酶活性。β-1,3-葡聚糖酶一方面和几丁质酶协同作用抑制真菌生长，另 一方面可以从寄主或病原物细胞壁释放出葡萄糖片段作为信号分子激发寄主的防卫反应[1]。 随着分子生物学的不断发展，现已从烟草、番茄、拟南芥、水稻、大麦、小麦、玉米、马铃 薯等植物中克隆了几十个β-1,3-葡聚糖酶基因[2]，成为植物抗性改良基因工程中非常重要的 基因资源。 白菜（Brassica campestris ssp.chinensis Makino ）霜霉病是由专 性寄生菌 （ Peronospora parasitica Pers.Fr）引起的一种破坏性极强的病害，选用抗病品种是解决 这一病害的最有效途径。本研究参照已发表的芜菁β-1,3-葡聚糖酶基因序列设计特异引物， 进行 RT-PCR 扩增，获得了白菜β-1,3-葡聚糖酶基因的 cDNA 序列，并对其进行序列分析， 为进一步探讨不结球白菜霜霉病抗性分子机制奠定重要基础。 2.材料与方法 1.1 植物材料 供试材料为白菜抗病品系雪克青，由南京农业大学白菜课题组提供。将白菜种子播种于 装有灭菌基质的穴盘中，在人工气候箱中按照光照 12h、黑暗 12h 光周期，20-25℃下培养。 待幼苗长至两片真叶时接种霜霉病菌，于接种后 48h 提取叶片 RNA。 1.2 总 RNA 的提取 采用 TRIZOL(MD Bio)法提取总 RNA。利用 RNase Free DNase Ⅰ(TaKaRa)除去总 RNA 中 本课题得到高等学校博士点科研基金 （编号：20030307021 ）资助 *通讯作者 Author for correspondence E-mail ：hxl@ 1 _______________________________________________________________________________中国科技论文在线 痕量 DNA 的污染。通过 1%琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 完整性。 1.3 RT-PCR RT 反应参照大连 TaKaRa 生物公司的 TaKaRa RNA PCR Kit(AMV) Ver. 2.1 试剂盒说明 书进行。特异引物