猪脑中硫氧还蛋白还原酶的纯化与表征.pdfVIP

ofAnhui 安徽农业科学，Journal Agn．Sci．2013，41(18)：7832—7835，7885 责任编辑陈玉敏责任校对卢瑶 猪脑中硫氧还蛋白还原酶的纯化与表征 陈文波1，邵方元2，刘晓2，王一飞1，刘忠1+(1．暨南大学，基因工程药物国家工程研究中心，广东省生物工程药物重点实验 室，生物医药研究开发基地，广东广州510632；2．广东药学院，广东省生物活性药物研究重点实验室，广东广州510006) Fast 200 Flow弱阴离子交换凝胶色谱柱层析、Blue—Sepharose亲和色谱柱层析、ResourceQ强阴离子交换色谱柱层析和Superdexprep grade凝胶过滤色谱柱层析等方法，从猪脑中分离并纯化TⅨR。采用聚丙烯酰胺电泳法、等电聚焦法、DTNB还原法和胰岛素还原法对 TrxR的性质进行表征。[结果]从猪脑中分离并纯化出TrxR，其纯度大于99％，是酶粗提液的6000倍，最终产率为13．9％。猪脑TrxR 的分子量为56．0 kD，等电点为5．0。以DTNB为底物测得其K。和k。值分别为62．9min～，以硫氧还蛋白为底物测得其 ixmol／L和467 813 K和k。值分别为3．9txmol／L和2min～。[结论]用新的方法从猪脑中纯化得到较高纯度的TrxR，为进一步研究该蛋白的结构和 功能奠定了基础。 关键词硫氧还蛋白还原酶；纯化 中图分类号S852．6文献标识码A 文章编号0517—6611(2013)18—07832—04 PurificationandCharacterizationofTllioredoxinReductasefromPorcineBrain CHENWen-boet BiomedicineResearchand Provincial of al(Guangzhou Center，GuangdongKeyLaboratory Development Bioengineering ResearchCenterofGenetic Medicine，NationalEngineering Medicine，JinanUniversity，Guangzhou，Guangdong510632) Abstract Theaimwasto andcharacterizethioredoxin brainnew Method Obiective purify reductase(TⅨR)fromporcineby methods．I Thioredoxinreductasewas from brainammoniumsulfate FastFlowweakanion purifiedporcineby dialysis．DEAE．Sepharose exchanger，Blue— column．Resourceanion and 200 filtrationin wascollectedand Sepharoseaffinity Qstrong exchangerSuperdexprepgradegel sequence．711ⅨR characterized andinsulinreduction ResultPureT“Rwas bySDS—PAGE，isoelectricfocusinganalysis，DTNBassay assay，respectively．1 o