浅谈如何利用iBoxExplorer实现荧光微球拍摄.PDFVIP

Application 浅谈如何利用 iBox Explorer 实现荧光微球的拍摄 荧光微球是一种圆形的球形微粒子，直径大小一般从 1 μm 到 1000 μm。当给定紫 外到红外光源的激发光源后，这些荧光微球会发出明亮的颜色。荧光微球一般带有多 种专有染料，使它们发出最明亮的荧光。荧光微球的典型的应用包括 ：医学成像、生 物医学技术研究、医疗器械及医学诊断的审定和验证。荧光微球已经广泛在荧光显微 技术中作为细胞抗原中的生物示踪剂来研究吞噬过程，测定组织中的血液流速。它们 也通常作为流式细胞仪的标准化试剂。 图 1 带内置显微镜的 iBox Explorer 成像系统 【材料和方法】 在玻璃划片上用 20 μl 的羧酸盐修饰的微球、15 μl 的红色荧光 (580/605) 剂来制备 样品。 荧光显微镜： 使用 BioLite 多谱氙灯 （UVP, LLC ）光源 （使用绿色激发光滤光片产生峰值为560 nm ，波带为54 nm (560/54) 的光源）激发样品。通过同轴（垂直）照明实现对样品区 域的照射。同轴光源通过iBox Explorer （UVP, LLC ）的内置显微镜光学原件将激发光 源传递到样品台。使用垂直光源对样品进行拍摄；515 nm 长波长分色镜 ，以获得最佳 的样品光照。散射光滤光片（峰值 605 nm ，条带50 nm ，605/50 ）选择图像中的红色 荧光。 成像软件： 使用 iBox Explorer 高分辨率、科学级制冷CCD 相机来拍摄样品图像，并使用 VisionWorks LS 获取和分析软件（UVP, LLC ）进行编辑。使用直方图调节模式将背景 荧光值移除，根据颜色参数，对单色图像进行伪色调节。 【结果和结论】 使用 iBox Explorer 成像系统在不同的放大倍数对荧光微球进行拍摄。图 2 表征了 8.8×和16.5×放大倍数下荧光微球（15 μm ）的高分辨率图像，分别对应了 1.7×1.7 mm 和 0.9 ×0.9 mm 的视野范围。由于肿瘤细胞的平均大小的范围在 13-20 μm ，这些结果成 功地验证了 iBox Explorer 成像系统可以完美地到单细胞水平。 A B 图2 使用 iBox Explorer 在不同放大倍数下拍摄的荧光微球 （A 8.8 ×放大倍数，对应1.7×1.7mm视野；B 16.5×放大倍数，对应0.9 ×0.9mm 视野 ） iBox Explorer 在活体和前体中的研究是一个强有力的资源。这项研究进一步补充 了iBox Explorer 在活体和前体医学诊断、流式细胞术应用研究中的多重应用能力。 具体请详询天美（中国）科学仪器有限公司。