携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的构建和鉴定.PDFVIP

384 生 物 工 程 学 报 赵晓飞 等/携带HIV-1 抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的构建及鉴定 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn March 25, 2015, 31(3): 384−393 DOI: 10.13345/j.cjb.140320 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 携带HIV-1 抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的 构建及鉴定 赵晓飞，郭景霞，刘晓娟，马正海 新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046 赵晓飞, 郭景霞, 刘晓娟, 等. 携带 HIV-1 抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的构建及鉴定. 生物工程学报, 2015, 31(3): 384–393. Zhao XF, Guo JX, Liu XJ, et al. Construction and identification of HSV-1 vector vaccine carrying HIV-1 antigen. Chin J Biotech, 2015, 31(3): 384–393. 摘 要: 利用细菌人工染色体技术将串联的HIV-1 gp 160、gag 和protease 基因以及表达元件插入 1 型单纯疱 疹病毒 (Herpes simplex virus type 1, HSV-1) 内部反向重复序列区，以获得携带HIV-1 抗原的单纯疱疹病毒载 体疫苗。首先将HIV-1 gp 160 (B 型和C 型) 、gag 和protease 基因串联克隆入pcDNA3 获得重组质粒pcDNA/gBgp 和 pcDNA/g Cgp ，重组质粒转染 293FT 细胞，Western blotting 检测 HIV 抗原表达。继而将 pcDNA/gBgp 和 pcDNA/g Cgp 中包括HIV-1 抗原基因和表达元件的表达框克隆入pKO5/BN 获得重组穿梭质粒pKO5/BN/gBgp 和pKO5/BN/g Cgp ，穿梭质粒电转含BAC-HSV 的大肠杆菌，筛选重组菌，提取重组DNA 并转染Vero 细胞， 挑取病毒蚀斑纯化重组病毒，Southern blotting 鉴定重组病毒DNA ，Western blotting 检测重组病毒感染细胞中 HIV 抗原表达，并分析病毒的增殖特性。结果表明，Western blotting 在pcDNA/gBgp 和pcDNA/g Cgp 转染的 293FT 细胞中检测到表达的gp160 和gag 蛋白。pKO5/BN/gBgp 和pKO5/BN/g Cgp 分别电转获得重组菌，并从 重组DNA 转染的Vero 细胞中纯化获得重组HSV ，Southern blotting 检测表明重组HSV 基因组发生特异性重 组，重组病毒感染细胞中检测到gp120 和gp41 ，且重组HSV 保留了在哺乳动物细胞中的复制能力。本研究获 得携载HIV-1 gp 160、gag 和protease 基因的重组HSV ，并保留了在哺乳动物细胞中的复制能力，可作为HIV-1 复制型病毒载体疫苗。 关键词: 1 型单纯疱疹病毒，HIV-1 抗原，病毒载体疫苗，细菌人工染色体 Received: June 10, 2014; Accepted: July 22, 2014 Supported by: Xinjiang Uygur Autonomous Region High-tech Research and Developm