陆地棉FLOWERING LOCUST同源基因GhFT1的克隆及功能分析.pdfVIP

Molecular Cloning and Functional Analysis of the FLOWERING LOCUS T (FT) Homolog GhFT1 from Gossypium hirsutum L. A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Natural Science By Guo Dan-li (Genetics) Dissertation Supervisor: Prof. Huang Xian-zhong June, 2015 万方数据 万方数据 摘要 开花具有重要的生理意义，是显花植物能够成功生殖的关键条件。其中编码磷脂酰乙醇胺结合 蛋白(phosphatidylethanolamine-binding protein, PEBP) 的FLOWERING LOC US T (FT)基因在营养 生长向生殖生长转变过程中起着重要作用。FT 基因在叶片中表达并翻译成蛋白后，经韧皮部进行长 距离运输至顶端分生组织，与FLOWERING LOCUS D (FD)蛋白形成复合物，促进下游花身份相关 基因APETALA1 (AP1), LEAFY (LFY), SUPPERSSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1 (SOC1), FRUITFULL (FUL)等的表达，促使植物早花。 目的：对棉花成花素基因 GhFT1 进一步克隆和功能分析，明确 GhFT1 基因在棉花中的表达模式， 对不同倍性的棉花FT 基因进行多态性分析，为深入研究GhFT1 基因功能奠定基础。 方法：基因克隆采用RT-PCR 结合RACE 技术，基因全长克隆采用PCR 技术；基因表达分析采用半 定量 RT-PCR 和 quantitative Real-time PCR (qRT-PCR) 技术；构建植物表达载体 35S::GhFT1 、 35S::GhFT1-GFP ，并通过浸花法转化拟南芥，将 35S::GhFT1 转化突变体 ft -10 。将转化 35S::GhFT1-GFP 拟南芥幼苗用20% 的蔗糖处理后进行激光共聚焦亚细胞定位分析。 结果：(1)将本实验室前期克隆的棉花成花素基因GhFTL1 进行重新克隆，在本研究中该基因命名为 GhFT1。首次扩增出GhFT1 基因5′非编码区，将扩增的序列与本实验室前期得到序列进行拼接发现 GhFT1 基因的cDNA 全长为818 bp ，编码174 个氨基酸。GhFT1 基因由4 个外显子和3 个内含子构 成，全长为3151 bp 。氨基酸比对分析表明GhFT1 蛋白具有保守的PEBP 家族保守基序、2 个保守的 关键氨基酸络氨酸(Y)和谷氨酰胺(Q)、以及 FT 家族中促进开花的保守片段 B 。系统进化分析说明 GhFT1 与可可的TcPEBP 蛋白亲缘关系近，属于FT-like 亚家族成员。(2) GhFT1 在棉花的不同组织 中均有表达，在花器官、茎和叶片中的表达量要高于其他组织；GhFT1 在棉花纤维起始期和延长期 表达量逐渐升高；GhFT1 随着棉花的生长发育表达量逐渐升高；GhFT1 基因在长短日照条件下，表 现出现昼夜节律表达模式。(3) 四倍体陆地棉、二倍体雷蒙德氏棉和亚洲棉的FT 基因都是由4 个外 显子和3 个内含子构成，其中四倍体陆地棉和二倍体雷蒙德氏棉的氨基酸