痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶的克隆表达和酶学性质研究.PDFVIP

第３８卷　 第６期 南京林业大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．６ ２０１４年１１月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｎｏｖ．，２０１４ － ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００ ２００６．２０１４．０６．０２０ 痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶的克隆表达 及酶学性质研究 李　 迅，顾华祥，王　 飞∗ （南京林业大学化学工程学院，江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室，江苏　 南京　 ２１００３７） 摘要：为了研究使用生物酶法制备共轭亚油酸的可行性，笔者对痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶进行了异源表达和 理化性质研究。 根据大肠杆菌偏好密码子，优化了来源于痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶（ＰＡＩ）的基因（ｐａｉ），将克 － 隆的基因在ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行表达，纯化目的蛋白，获得重组ＰＡＩ 蛋白。 ＳＤＳ ＰＡＧＥ 结果显示，重组ＰＡＩ 分子 质量为４８ｋｕ，重组蛋白主要以包涵体沉淀的形式存在。 经测定重组ＰＡＩ在３５ ℃、ｐＨ７．０ 时酶活最高，比酶活为 ２＋ ７５２．３ μｍｏｌ／ （ｍｉｎ·ｍｇ）。 经３５ ℃保温２ｈ，酶活保持９０％以上，ｐＨ 为６．５～７．０ 时，ＰＡＩ具有较好的稳定性，Ｍｎ 和 ２＋ Ｚｎ 对酶活力分别有２２．４％和 １５．８％的抑制作用，以亚油酸为底物时该酶的Ｋ 值为１．１３ ｍｍｏｌ／ Ｌ，ｋ 为４．６７ ｍ ｃａｔ －１ ｓ 。 相关分析表明，痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶性质优良，适合以亚油酸为底物生物催化制备共轭亚油酸。 关键词：痤疮丙酸杆菌；亚油酸异构酶；共轭亚油酸；酶学性质 － － － 中图分类号：Ｑ７８６　 　 　 　 　 　 　 　 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００ ２００６（２０１４）０６ ０１０５ ０５ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｉｎｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｓｏｍｅｒａｓｅ ｆｒｏｍＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ ＬＩ Ｘｕｎ，ＧＵ Ｈｕａｘｉａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｆｅｉ∗ － （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ｂｉｏｍａｓｓ Ｂａｓｅｄ Ｇｒｅｅｎ