测序分析的基本原理与应用.PDFVIP

测序分析的基本原理和应用 Field Application Scientist Tel :800 820 8982/400 820 8982 E-mail: cntechsupport@ The world leader in serving science 1 主要内容 测序PCR反应 BigDye® Terminator 的不同版本 模板制备 引物设计 测序PCR反应产物纯化 测序应用 2 测序PCR反应 3 测序PCR反应 –双脱氧末端终止法 5’ O O 无3’ OH的ddNTP阻止下一个dNTP的掺入 5’ O 3’ H O 3’ OH 4 测序PCR反应 变性 DNA模板 退火 引物 A G T C A 测序酶 荧光标记的ddNTP dNTPs （BigDye® Terminator） 延伸/终止 5 荧光标记的测序反应产物  ddNTP 被加到正在合成的链上，由于它的3’-OH 已被氧化，下一个 dNTP的5’-磷酸基团不能与之形成磷酸二酯键，使合成终止  测序反应的延伸阶段，ddNTP在不同位置掺入产生一系列不同长度的 新的DNA片段 6 基因分析仪的基本构造 计算机分析测序数据 CCD 相机记录所有通道信号 毛细管 激光激发所有通道 电泳方向