生防枯草芽孢杆菌B29菌株抗菌物质初步研究.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（２）：５９～６５ 生防枯草芽孢杆菌Ｂ２９菌株抗菌物质的初步研究 １，２ １ ３ ２ 李　晶 　杨　谦 　赵丽华 　王玉霞 （１哈尔滨工业大学生命科学与工程系　哈尔滨　１５０００１　２黑龙江省科学院应用微生物研究所　哈尔滨　１５００１０） （３黑龙江大学　哈尔滨　１５００８０） 摘要　通过检测生防枯草芽孢杆菌除菌上清液对黄瓜枯萎病菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｉｕｍｆ．ｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 菌丝生长和分生孢子萌发的抑制作用，初步研究了生防枯草芽孢杆菌Ｂ２９菌株抗菌物质的活性。 结果表明，枯草芽孢杆菌Ｂ２９菌株分泌的抗菌物质不仅抑制病原菌的生长；并可抑制尖孢镰刀菌 孢子的萌发，使分生孢子萌发畸形。研究确定了该菌株抗菌物质产生的最佳条件：培养温度 ３０℃；培养基初始ｐＨ值７．５；装液量为２５０ｍｌ三角瓶装液７５ｍｌ培养基；培养时间１２０ｈ。经３０％ ～７０％硫酸铵沉淀获得的抗菌粗提物对６０℃处理具有稳定性（活性达９７．８％）；对蛋白酶Ｋ具有 部分耐受性，对胰蛋白酶和胃蛋白酶较敏感。 关键词　生物防治　枯草芽孢杆菌　抑菌作用　抗菌物质 中图分类号　Ｑ８１９ 　　化学农药对植物病虫害的防治对农业生产具有重 黄瓜枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 要作用，但长期连续不合理的使用造成病菌和害虫的 Ｏｗｅｎ）由本研究室分离、鉴定并保存。Ｂ２９菌株对尖 抗药性不断增强，形成用药量与病害相互递增的恶性 孢镰刀菌、立枯丝核菌、腐霉菌等多种土传病原菌具有 循环，增加了农产品中农药的残留量，对人畜安全和生 ［９］ 强烈的拮抗作用，经鉴定为枯草芽孢杆菌 ，为一株极 态环境的平衡构成极大的威胁。目前生防微生物因其 具应用潜力的生防细菌。 安全及有效性成为植物病虫害防治研究的热点［１］。芽 １．１．２　培养基　生防枯草芽孢杆菌液体发酵用培养 孢杆菌是土壤和植物微生态区系的优势生物种群，许 基为ＮＹＤ培养基，其组成为每升含葡萄糖１０ｇ，牛肉浸 多性状优良的菌株表现出对多种植物病原菌的拮抗作 膏８ｇ，酵母膏５ｇ，ｐＨ值调至７．０～７．２。病原菌培养用 ［２～４］ 用 。枯草芽孢杆菌能产生多种抑制植物病原真菌 培养基为马铃薯固体培养基，其组成为去皮马铃薯 ［５，６］ 的抗菌物质，主要为低分子量的多肽类抗生素 和一 ２００ｇ，葡萄糖１０ｇ，琼脂１５ｇ，ｐＨ自然。 ［７，８］ 些高分子量的蛋白类抗菌物质 。本文以黄瓜枯萎 １．２　方　法 病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ）作为指示菌， １．２．１　病原菌菌丝块和孢子悬液的制备　将活化好 对自主筛选的一株高效生防枯草芽孢杆菌Ｂ２９菌株产 的病原菌接种于ＰＤＡ平板上，２８℃培养５ｄ，用打孔器 生抗菌物质的发酵条件进行研究并探讨了抗菌粗提物 制成直径７ｍｍ的菌丝块备用。将病原菌培养至孢子形 的基本理化特性，为以抗菌活性物质为主要成分的微