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网络出版时间：2016-12-01 11:04:23
网络出版地址：/kcms/detail/12.1355.N1104.006.html
第 32 卷 第 期 天津科技大学学报 Vol. 32 No.
2017 年 月 Journal of Tianjin University of Science & Technology . 2017
DOI:10.13364/j.issn.1672-6510
绿色荧光蛋白 GFP 多克隆抗体的制备及
在多种细胞中的特异性鉴定
1 1 1 1, 2 1, 2
董 彬 ，胡贺贺 ，王 晶 ，孟德梅 ，樊振川
(1. 食品营养与安全教育部重点实验室，天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457 ；
2. 天津科技大学新农村发展研究院，天津 300457)
摘 要 ：绿色荧光蛋白是当前在生物及生物医学研究当中应用最为广泛的一种荧光标记蛋白．为开发一种高灵敏度、
高特异性以及简单经济的 GFP 多克隆抗体，并使之适用于在跨物种细胞里表达的 GFP 蛋白进行检测 ，本文利用 gfp
基因 cDNA 全序列分别构建了带有 6 ×His 和 GST 标签的原核表达载体 pET28A-gfp 和 pGEX-2T-gfp ，并将其转入大
肠杆菌 (Escherichia coli)BL21 (DE3)细胞进行诱导表达 ，而后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS)表达鉴定 ，分别
4 4
获得了相对分子质量为 2.6 ×10 和 5.2 ×10 的重组 6 ×His/GST-GFP 融合蛋白．将亲和纯化的 6 ×His-GFP 融合蛋白
﹕
免疫新西兰大白兔 ，采集第 5 次免疫后血清用 ELISA 测定效价为 1 32,000．抗血清依次经 Protein A 亲和纯化和
GST-GFP 抗原抗体纯化后 ，用免疫印迹实验
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