基因工程2 基因工程的基础知识.ppt

第二章 基因工程的基础知识 2.1 DNA的分子结构2.1.1 多核苷酸链  多核苷酸链(polynucleotidechain)是核酸(DNA和RNA)结构的基础。它是由核苷酸通 过3，5—磷酸二酯键连接成的线型大分子。核苷酸是多核苷酸链的结构单位。 核苷酸由三部分组成：戊糖、磷酸和碱基。在核苷酸分子中，戊糖的β-半缩醛羟基与碱基中的氢(嘧啶环1位，嘌呤环9位上的氢)失水缩合成N—苷键而形成核苷，核苷的5位与磷酸通过酯键形成5—核苷酸。 不同的核苷酸用碱基第一个字来命名。核苷酸分子的碱基类似于蛋白质氨基酸的侧链，它们影响着所形成的核酸的结构和功能。 嘧啶和嘌呤都是含氮杂环化合物，具弱碱性。碱基难溶于中性水溶液中，它们的这一疏水特性对DNA的结构具有重要意义。 碱基的另一重要特性是其环氮及所含的官能团能成为氢键的供体或受体。在DNA分子中，一定的碱基通过这些氢键相缔合，这对DNA作为遗传物质具有首要意义。 多核苷酸链是由核苷酸通过3，5，—磷酸二酯键连接成的很长的线型分子。 在多核苷酸链中，交替的磷酸和2—脱氧核糖构成了分子的骨架，碱基为侧链。不同多核苷酸链的骨架是相同的，不同的是碱基的种类和排列顺序。多核苷酸的碱基可简化表示如下图。 DNA的一级结构: 由A、T、G、C四种脱氧核苷酸通过3’-5’-磷酸二酯键连接成的线形结构（排列顺序）。 DNA一级结构的意义： 蕴藏遗传信息 决定DNA的二级结构和空间结构 2.1.2 DNA的二级结构 Watson 和Crick于1953年提出了DNA的双螺旋结构模型，其要点为： DNA 分子是由两条方向相反的平行多核苷酸链构成的，两条链的磷酸-戊糖骨架盘旋成直径为2nm的双螺旋。两股链在螺旋轴上的间距并不相等，从而在分子表面形成大沟和小沟。 两条链由碱基间的氢键相连，碱基对的平面穿过螺旋轴，约与螺旋轴垂直。相邻碱基对上下间距0.34nm，双螺旋的每一转有10对核苷酸，每转高度为3.4nm。相邻核苷酸彼此相差36o。 碱基的配对规律：A-T, T-A, G-C, C-G。 A和T间构成二个氢键，G和C间构成三个氢键。如果一条链的碱基顺序已确定，则另一条链必有相对应的碱基顺序。 DNA是遗传信息的载体，它的核苷酸序列不仅编码各种蛋白质，并且也与基因表达的调控有关，即它们能为一些蛋白质因子所识别和结合。现在认为这一过程主要是通过大沟实现的，因为大沟比小沟携带更多的形成氢键的信息。 2.1.3 DNA的三级结构 DNA双螺旋的不同类型： DNA双螺旋分子进一步盘绕、扭曲。 正常的DNA双螺旋由于解旋或增旋产生张力，促使DNA内部原子位置重排，导致DNA分子本身发生卷曲：双螺旋DNA的松开导致形成负超螺旋，而DNA的拧紧则导致形成正超螺旋。 生物体内都是负超螺旋。 环型DNA分子会由超螺旋化而变得更为致密，它们在超离心中的沉降速率和在凝胶电泳中的迁移速度都增加，故超螺旋DNA可以通过这两种方法来检测和分离。 2.1.4 DNA的变性与复性 DNA的变性(denaturation)：高温、酸、碱以及某些变性剂能破坏DNA中的氢键，使双螺旋结构分开成单链的无规律的“线团”。 DNA的复性(Renaturation)：变性DNA恢复其原有结构和性质。复性是一个配对、解链，再配对、再解链……不断重复的过程，以至找到完全的配对。 2.1.5 DNA和基因组织 DNA——生物遗传信息的载体 生物体的遗传特征是由DNA中特定的核苷酸顺序所决定的。 基因是遗传的最小功能单位，DNA分子含有多个基因。并不是所有的基因都为多肽链编码，有些基因为不同种类的tRNA和rRNA编码。 真核和原核生物基因组的比较 DNA的碱基组成是均匀的，即使DNA被破碎为较小的，例如10kb片段后，氯化铯密度梯度仍只能使其形成单一的峰。可是真核生物DNA的碱基组成与此相反，显示出很大的不均匀性。 原核生物DNA一般没有重复顺序，真核生物DNA都含有重复顺序。 高度重复序列：在基因组中拷贝数可多达十万次的一种简单的重复序列，有的重复单位长度不超过6bp。这些重复序列常称为卫星DNA（satellite DNA)。 中度重复序列：指在基因组中有10个以上直至几千个拷贝的长约300bp的序列，如rRNA和tR