以减毒沙门氏菌呈递生长抑素基因疫苗免疫母鼠生物.docVIP

目 录 摘 要 I 关键字： II Abstract II Key word: III 1前言 1 2．材料和方法 2 2.1 材料 2 2.1.1免疫用基因疫苗 2 2.1.2试验用小鼠 2 2.1.3试验用仪器 2 2.1.4主要试剂 2 2.1.5主要试剂的配制 2 2.2 试验方法 3 2.2.1 重组沙门氏菌中质粒的提取及鉴定 3 2.2.2 疫苗准备 3 2.2.3 试验动物免疫方法 3 2.2.4 试验动物的饲养及管理 3 2.2.5 组织样的采集和处理 3 2.2.6 基因组DNA的质量检测及内参照PCR 4 2.2.7 PCR方法的敏感性和基因整合可能性的分析: 4 3 结果与分析 5 3.1 重组质粒pGM-CSF/SS的酶切鉴定 5 3.2　PCR敏感度检测 5 3.3　母鼠及仔鼠基因组DNA质量检测 6 3.４　母鼠及仔鼠基因整合检查 7 4 讨论 8 4.1 关于免疫组各组细胞基因组DNA的提取分析 9 4.2 关于PCR敏感性分析 9 4.3 关于pGM-CSF/SS基因整合的可能性分析 9 5 结论 10 参考文献 10 致 谢 12 以减毒沙门氏菌呈递的生长抑素基因疫苗免疫母鼠的生物 安全性研究 摘 要 DNA疫苗的生物安全性是其走向临床前所须解决的关键问题之一。将以减毒沙门氏菌呈递的pGM-CSF/SS DNA疫苗免疫母鼠,验证其对母鼠的安全性,为临床应用提供安全性证据。将45只5周龄昆明小白鼠随机分为3组,分别用pGM-CSF/SS（A组）、减毒沙门氏菌空菌（K组）、PBS（C组）口服免疫,剂量为200μL, 浓度为2 ×1010 cfu/ mL.进行免疫后,待母鼠产仔后3周提取母鼠心脏、肝脏、脾脏、肺、肾、生殖各组织DNA，提取仔鼠3、6、9周仔鼠心脏、肝脏、脾脏、肺、肾、生殖各组织DNA,利用PCR技术来检验母鼠和仔鼠各组织基因整合的可能性。结果显示：pGM-CSF/SS DNA疫苗免疫母鼠后，使用引物扩增和凝胶电泳检测母仔鼠各组织基因组,其发生基因整合的频率（2.3×10-8）远远低于基因自发突变的频率（2×10-6），因此认为pGM-CSF/SS DNA疫苗不会随机插入到宿主基因组中，具有较高的生物安全性。 关键字： 生长抑素； DNA疫苗； 生物安全性； 基因组整合 Evaluation on the biosafety of pGM-CSF/SS Somatostatin Dalivered by Attenuated Salmonella in Female-mice Abstract The biosafety of DNA vaccine is one of the key questions which should be solved before it is used in the clinical trail. To study the Evaluation on the biosafety of pGM-CSF/SS somatostatin delivered by attenuated salmonella in female-mice, In order to evaluate the biosafety when it is used in the clinical trail. 45 female mice at the age of 5 weeks were selected and divided randomly into 3 groups. Mice were orally administered with pGM-CSF /SS plasmid (A)、attenuated Salmonel l a. (K)、and PBS(C)with the dosages of every groups were 2 ×1010 cf u/ mL, 200μL respectively. After 3 weeks of postpartum, total DNA in female mice who had been vaccined and 3, 6, 9 weeks offspring of heart、liver、spleen、lung 、kidney and gonad were extracted, the possibility of integration of DNA vaccine plasmids into mice genome was analyzed by PCR technology. By using primer amplification and gel elect