实验二叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量一.实验原理.pptVIP

目镜测微尺 奥林巴斯显微镜常用测微尺 * 实验二 叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量 一. 实验原理 1.组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。 2. 应用显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，得出细胞的大小。 二.试剂与器械 1. 器材 : 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。烧杯2个, 250ml量筒1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试管架5个，纱布若干，无荧光载片和盖片各4片。 2. 试剂: 0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridine orange)。 三. 实验步骤 （一）叶绿体的分离与观察 1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min，弃去沉淀。 5. 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体 (混有部分细胞核)。 6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在显微镜下观察。 基础知识 (二）测微尺的使用操作 1. 卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。 2. 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。 3. 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的0点一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线(图1-6)。 4·记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格的长度等于多少μm 目镜测微尺每格的长度/ μm=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数 (三) 鸭血细胞的观察测量 将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上，滴数滴瑞氏-吉姆萨染液欲涂片上，静置染色1分钟，滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液，用牙签轻轻搅拌混匀，再静置染色5－10分钟，最后用清水缓缓冲洗1分钟，倾斜放置，凉干后进行观察测量。 *