柱色谱实验.ppt

柱色谱实验;一、实验目的;二、实验原理; 柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂。后者以硅胶，硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收大量的液体为固定相。当加入的洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中，不同组分或不同色带就能分别收集，从而达到分离纯化的目的。;柱色谱;2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依次洗脱。 常用洗脱剂的极性： 石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯＜ 二氯 甲烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜ 乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜ 甲醇＜ 水＜ 乙酸;操作过程;;柱色谱分离过程（附）;1. 装柱要紧密，要求无断层、无缝隙，无气泡。 2. 在装柱、洗脱过程中，始终保持有溶剂覆盖吸附剂。一个色带与另一色带的洗脱液的接受不要交叉。;七、思考题 1、为什么极性大的组分要用极性较大的溶剂洗脱？ 答：根据相似相溶原理，极性大的组分在极性大的溶剂中溶解度较大，易于（和极性小的组分分离）洗脱。 2、柱子中若有气泡或装填不均匀，将给分离造成什么样的结果？如何避免？ 答：柱子若装填不均匀或有气泡会造成洗脱剂流动不规则而形成“沟流”，引起色谱带变形，影响分离效果。 操作方法：用溶剂和少量吸附剂充填柱子，装填到合适的高度。在装填之前，应将被玻璃棉和砂子用溶剂润湿，否则柱子会有空气泡。此外，还可以预先将溶剂和吸附剂调好，倒入柱子里，使它慢慢沉落，如果柱子底部有旋塞，可以打开旋塞。溶剂慢慢流过柱子，使吸附剂装填均匀。也可以用铅笔或其他木捧敲打，使吸附剂沿管壁沉落。