第七章 微生物的遗传与变异.ppt

原核生物的质粒 1、定义 典型质粒：凡游离于原核生物核基因组以外，具有独立复制能力的小型共价闭合环状的dsDNA(cccDNA)分子。 线形质粒 2、特点 具有麻花状的超螺旋结构，大小一般为1.5~300kb。 携带某些核基因组上所缺少的基因，使细菌等原核生物获得了某些对其生存并非必不可少的特殊功能。 复制类型有严紧型复制控制和松弛型复制控制两种。 含质粒的细胞在正常的培养基上受吖啶类染料、丝裂霉素C、紫外线、利福平等因子处理后，会发生质粒消除。 具有与核基因组整合与脱离功能，这类质粒又称为附加体。 质粒与质粒间，质粒与核染色体间发生基因重组。 原核生物的质粒 3、质粒在基因工程中的应用优点 ①体积小，便于DNA的分离和操作； ②呈环状，使其化学分离过程中能保持性能稳定； ③有不受核基因组控制的独立复制起始点； ④拷贝数多，使外源DNA 可很快扩增； ⑤存在抗药性基因等选择性标记，便于含质粒克隆的检出和选择 （如E.coli 的pBR322质粒） 4、质粒的分离与鉴定 分离：细胞的裂解、蛋白质和RNA去除以及质粒DNA与染色体DNA分离。 鉴定：电镜、琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳及密度梯度离心法。 第一节 遗传变异的物质基础 二、遗传物质在细胞内存在的部位和方式 2、基因水平： 真核生物的基因与原核生物的基因最明显的不同是它们一般无操纵子结构，存在着大量不编码序列和重复序列，转录和转译在细胞中有空间分隔，以及基因被许多无编码功能的内含子阻隔，从而使编码序列变成不连续的外显子状态。 艾姆氏试验 基本原理： S.t.（鼠伤寒沙门氏菌）的his-菌株在基本培养基[-]平板上不能生长，而其回复突变成his+菌株后则能生长。 滚环模型 F+细胞内，F因子的一条DNA单链在特定位点上发生断裂； 断裂的单链逐步解开，同时以另一条留存的环状单链做模板，通过模板的滚动，一方面把解开的单链以5’为先导通过性菌毛推入F– 细胞中，另一方面，在供体细胞内以滚动的环状模板重新合成一条互补的环状单链，以取代传递到F– 细胞中的那条单链。这种DNA复制机制称为滚环模型； 接合中断试验与染色体图 原理： 接合试验的DNA转移过程存在着严格的顺序性，在接合进行中采用定时人为中断的方法，可以获得呈现不同数量 Hfr 性状的 F– 接合子，据此，可以选定几种有特定整合位点的 Hfr 菌株，使之与F–菌株进行接合，并在不同时间使其中断，最后，根据F–中出现Hfr菌株中各种形状的时间顺序（分钟），可以绘出较为完整的环状染色体图（chromosome map）。 在 第四节 基因工程(遗传工程) 三、基因工程的应用 一）在生产多肽类药物、疫苗中的应用 功能 抗肿瘤、抗病毒功能、治疗心血管系统疾病、预防传染病、调节人体生理。 生产阶段 细菌基因工程 酵母菌等真核微生物细胞的基因工程 哺乳动物细胞基因工程 转基因动物或转基因植物基因工程 二）改造传统工业发酵菌种 目前在氨基酸、酶制剂等领域已有大量成功的例子 第四节 基因工程(遗传工程) 三、基因工程的应用 三）动、植物特性的基因工程改良 动物品质改良：生产多肽类药物为主的转基因动物； 植物品质改良：生产多种转基因植物。 四）基因工程在环境保护中的应用 培育同时能分解多种有毒物质的遗传工程菌（超级菌） 使用生物农药代替毒性大、对环境污染严重的化学农药 基因工程的实质 创造了一种能利用微生物或微生物化的动、植物细胞的优越体制和种种优良的生物学特性，来高效地表达生物界中几乎一切物种的优良遗传性状的最佳手段。 载体、工具酶、受体、微生物工程及供体均来源于或主要来源于微生物 三、菌种的保藏 三)方法 首先应保持原菌优良性状长期稳定，同时还应考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。 生活态——传代培养保藏法 休眠态——干法和湿法 冰箱保藏法(斜面) 冰箱保藏法(半固体) 石蜡油封藏法* 甘油悬液保藏法 砂土保藏法 冷冻干燥保藏法（用户分发） 液氮保藏法（原种保藏） 2、F-菌株 即“雌性”菌株，指细胞内无F质粒，细胞表面也无性菌毛的菌株。 可以通过与F+、F’或Hfr菌株接合而接受供体菌的F因子、F’因子或Hfr菌株的部分或全部遗传信息，相应地可以转变成F+菌株、 F’菌株或重组子。 据估计，从自然界分离到的2000株E. coli中约有30%是F–菌株。 3、Hfr菌株 即高频重组菌株，其细胞中的F质粒从游离态转变为在核染色体特定位点上的整合态，故它与F-菌株相接合后，发生基因重组的频率要比单纯用F+菌株高。 当Hfr菌株与F-菌株接触时，Hfr的染色体双链中的一条单链在F质粒处断裂，由环状变为线状，整段单链线状染色体从5’端开始等速进入F–细胞。 由于种种原因DNA转移过程常会发生中断，所以越是前端的基因进