高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术.ppt

课题3 血红蛋白的提取和分离 实验操作 2.粗分离－－透析 ③过程： ①透析目的：除去样品中分子量较小的杂质 ②原理： 利用透析袋的半透性 某些杂质分子比血红蛋白分子小，可透过透析袋 课题3 血红蛋白的提取和分离 实验操作 3.纯化 1)凝胶色谱柱的制作： ①玻璃管 ②底塞的制作 ③顶塞的制作 ④组装 ⑤安装其他附属结构 原理 用凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去 步骤 课题3 血红蛋白的提取和分离 实验操作 3.纯化 步骤 2)凝胶色谱柱的装填 ①凝胶的选择 ②凝胶的前处理 ③凝胶色谱柱的装填方法 注意:a凝胶装填时尽量紧密,以降低凝胶颗粒之间的空隙 b装填凝胶柱时不得有气泡存在 课题3 血红蛋白的提取和分离 实验操作 3.纯化 步骤 2)凝胶色谱柱的装填 ①凝胶的选择 ②凝胶的前处理 ③凝胶色谱柱的装填方法 注意:a凝胶装填时尽量紧密,以降低凝胶颗粒之间的空隙 b装填凝胶柱时不得有气泡存在 ④洗涤平衡 注意：a液面不要低于凝胶表面， b不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象 3.样品的加入和洗脱 1.调液面 2.加样 3.再调液面 4.洗脱 5.收集 缓冲液 凝胶 课题3 血红蛋白的提取和分离 实验操作 3.纯化 步骤 3)样品加入与洗脱 注意：a不要触及并破坏凝胶面。b贴壁加样。 c使吸管管口沿管壁环绕移动。 * * * * 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一.基础知识 DNA粗提取的基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 1.提取生物大分子的基本思路： 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 2.DNA的理化特性 1)DNA的溶解性 在NaCl溶液浓度在0.14 mol/L时,DNA溶解度最小； 低于(或高于)0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的降低(或增加)而逐渐增大。 DNA的不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精 2)DNA的其它特性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性 ③洗涤剂可以瓦解细胞的细胞膜，但对DNA没有影响 3.DNA的鉴定原理 1)DNA ＋ 二苯胺试剂 沸水浴 溶液变蓝色 2)DNA可被甲基绿染成绿色 一)实验原理 二.实验设计 1.破碎细胞，释放核物质 动物细胞 加蒸馏水让细胞吸水胀破,过滤得滤液 植物细胞 加洗涤剂和食盐,充分研磨 蒸馏水对于鸡血细胞来说是低渗溶液,水分可大量进入鸡血细胞,是细胞胀裂,从而释放DNA 搅拌可加速细胞破裂 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 二)实验材料的选取 选DNA含量较高的生物组织作为材料,成功可能性更大 材料：可选鱼卵、猪肝、鸡血 2.除去杂质，分离出DNA 用浓度为2mol/L的NaCl溶液溶解DNA,逐渐加水稀释,当降至0.14mol／L时(溶解度最低)可以使DNA析出 向DNA的盐溶液，逐渐加酒精，可析出DNA 三) 实验步骤 1.0.1g/ml的柠檬酸钠溶液,按1:2的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀，将血液置于冰箱中24小时,弃上部澄清液 鸡血加入柠檬酸钠溶液液，是为了防止血液凝固。 三) 实验步骤 2.取烧杯中的血细胞液约5~10ml加入到100ml烧杯中， 向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速 搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂 3.将2mol/L的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻棒 沿一个方向搅拌，使DNA溶解于氯化钠溶液中，过滤 取滤液 三) 实验步骤 4.将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的DNA缠绕于玻棒末端。 5.将析出的DNA再溶解于2mol/L的氯化钠溶液中。 6.在DNA的氯化钠溶液中倒入95%的酒精50 ml（冷却过的酒精效果较好)，使DNA再次析出，用玻棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。 2mol/LNaCl溶液 冷酒精 三) 实验步骤 7.DNA的鉴定：取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，水浴加热10min左右，冷却，观察实验现象。 例1.下列关于DNA的叙述正确的是( ） A.随着氯化钠溶液浓度增大，DNA在氯化钠溶液中的溶解度也增大 B.随着氯化钠溶液浓度的减小，DNA在氯化钠溶液中的溶解度也减小 C.DNA不溶于酒精，也不溶于0.14mol/L的氯化钠溶液 D.DNA与二苯胺试剂在沸水中加热，溶液变蓝