研究报告一株高抗汞细菌的分离鉴定及其抗性基因的克隆与表达.PDFVIP

Re se arch Pap er 研究报告 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 49 ( 12) :1628 - 1633 ; 4 December 2009 ISSN 0001 - 6209 ; CN 11 - 1995Q http :journals. im. ac . cnactamicrocn 一株高抗汞细菌的分离鉴定及其抗性基因的克隆与表达 1 ,2 2 1 3 1 曾艳 ,陈强 ,王敏 ,孙建光 ,高俊莲 (1 北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心 ,北京 　100097) (2 四川农业大学资源环境学院微生物学系 ,雅安 　625014) (3 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 ,农业部作物营养与施肥重点实验室 ,北京 　100081) 摘要 :【目的】本研究旨在从重金属汞抗性细菌中分离鉴定汞抗性基因【方法】从北京凉水河河床底泥中分离 抗汞细菌 ,采用 16S rRNA 基因序列分析结合生理生化特征对菌株进行鉴定 。根据 GenBank 中已发表的多种 抗汞细菌的 merA 基因序列设计引物 , 以抗性细菌基因组 DNA 为模板 , 扩增 merA 基因 , 并在大肠杆菌 ( ) ( ) Escherichia coli BL2 1 DE3 表达 。同时对表达菌株的重金属汞抗性进行测定 。【结果】分离得到一株能在含 HgCl2 为 70 mgL 的平板上生长 良好的高抗汞细菌 ,编号为 KHg2 。16S rRNA 基因序列分析结果表明 ,菌株 KHg2 与 B acillus silvestris 的模式菌株DSM12223T 有 96 %的同源性 ,其形态特征及生理生化特性与文献报道的 B acillus silvestris 一致 。从菌株 KHg2 中扩增得到 1687bp DNA 片断 ,其序列与 Pseudomonas p utida 的merA 基因 序列同源性达到 99 % ,将该 DNA 片断克隆于p ET30a ( + ) 得到重组质粒 p ZY2 ,转化宿主菌获得表达菌株 E . ( ) coli BL2 1 DE3 ·p ZY2 ,经 IPTG 诱导后产生相对分子量约为 33KD 的蛋白。重金属汞抗性测定结果表明 ,表 ( ) ( ) 达菌株 E . coli BL2 1 DE3 ·p ZY2 可以在含 HgCl2 为 20 mgL 的培养基中生长 ,而转入空载体 p ET30a + 的 ( ) ( ) 阴性对照菌株 E . coli BL2 1 DE3 p ET30a + 则不能在含 HgCl2 为 20 mgL 的培养基中生长 。【结论】分 离的抗汞菌株 KHg2 与 B acillus silvestris 关系密切 ;从菌株 KHg2 中克隆到汞抗性基因 merA ,并在大肠杆菌中 得到了成功表达 ;表达 merA 基因的大肠杆菌具有抗重金属汞的特性 。 关键词 : 重金属污染土壤 ; 抗汞细菌 ; 分离鉴定 ; 16S rRNA 基因序列分析 ; merA 基因克隆与表达 中图分类号 :Q939 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2009) [3 ] 　　农田土壤重金属污染已成为全球关注的环境问 性大 等特点 , 因此很难治理 。国外研