LYVE1在发育中大鼠肾内的表达研究论文.docVIP

　　LYVE1在发育中大鼠肾内的表达研究论文 【摘要】 目的 探讨淋巴管内皮细胞透明质酸受体1染色阳性（LYVE1+）淋巴管在大鼠肾内的分布。方法 胚胎期第14、16、18、20天的胎鼠，和出生后第1、4、14、21天及成年大鼠的肾脏切成厚50 μm的薄片，进行LYVE1免疫组织化学染色。结果 LYVE1+的淋巴管丛最早可在胚胎期第16天的大鼠肾脏检测到。在胚胎期第18天，出生后第1、4、7天和成年大鼠肾脏可见到LYVE1+丛主要位于肾脏皮质的动脉周围。LYVE1+细胞在胚胎期第14天可检测到，主要位于髓质，出生后阳性细胞数量显著增加，到出生后第21天仅在外髓外带见到少量的LYVE1+细胞。结论 LYVE1+淋巴管主要位于肾脏的动脉周围，LYVE1+细胞主要位于肾脏髓质。 【关键词】 淋巴管内皮细胞透明质酸受体 肾脏 淋巴管 【Abstract】 Objective To investigate the distribution of intrarenal lymphatic vessels in developing rat using the lymphatic marker LYVE1.Methods The rat kidneys from embryonic day 14 (E14) to E20, from neonates at pup day 1 (P1) to P21 and adults phatic vessels ed lymphatic plexus in rat kidney at the E16 stage. From fetal stage E18 to Adult, LYVE1+ lymphatic vessels ainly in the medulla at E14. The numbers of the cells increased gradually, then reduced. At P21 LYVE1+ cells phatic vessels edulla. 【Key phatic vessels 在人类和各种动物包括小鼠其肾内淋巴管的分布已有研究［1～3］.freelphatic endothelium specific hyaluronan receptor1，LYVE1)研究大鼠肾脏内淋巴管的表达。恶性肿瘤主要通过血道和淋巴道形成远处转移，统计表明，50%以上的肿瘤经过淋巴道转移，且发生较早，因此，本研究也为肿瘤淋巴道转移机制及抗肿瘤研究提供实验基础。 1 材料与方法 1.1 材料与来源 应用Sprague DamunoResearch Laboratories（稀释度1∶100），明胶、皂苷和牛血清白蛋白均购自SigmaAldrich（美国）。 1.3 实验方法 试验动物用16.5%的乌拉坦（1 ml/kg）腹腔内注射麻醉。妊娠14～16 d的大鼠仰卧位固定于手术台上，剖腹取胎鼠，分离胎鼠肾脏，PLP固定4°C过夜。利用振动切片机（Pelco 102, Series 1000; Technical Products International, 美国）将肾脏切成厚50 μm组织片，放入-70°C冰箱保存。 出生后14～21 d及成年大鼠，PLP腹主动脉灌注固定。分离肾脏，利用超薄切片机（Leica公司，德国）切成1～2 mm 厚，PLP固定4°C过夜。 从-70°C冰箱中取出组织，新配制的50 mM NH4Cl/PBS 洗10 min×3次； 0.3% H2O2 10 min；缓冲液B（0.01 M PBS 100 ml，明胶0.2 g，皂苷0.05 g，牛血清白蛋白1.0 g）洗4 h。以上操作均在4°C环境中进行。 在缓冲液B稀释的LYVE1中孵育，4°C过夜。第2天从冰箱取出组织，先室温放置1 h，然后缓冲液C（0.01 M PBS 100 ml，明胶0.2 g，皂苷0.05 g，牛血清白蛋白0.1 g）洗1 h。在过氧化物酶结合的驴抗兔IgG中孵育2 h，缓冲液C洗30 min。每孔滴加0.1%DAB 300 μl，滴加3%过氧化氢溶液45 μl，显色10 min。梯度酒精脱水，丙酮15 min×2次，丙酮：环氧树脂=3∶1 混合液内1 h，丙酮∶环氧树脂=1∶1混合液内1 h；丙酮∶环氧树脂=1∶3混合液内1 h，纯环氧树脂中过夜。封片，烤干。镜下观察，拍照。 2 结果 2.1 LYVE1在大鼠肾脏中的表达 LYVE1+的淋巴管丛最早可在胚胎期第16天检测到（图1C）。在胚胎期第18天（图2A），出生后第1（图2B），4（图2C），7天（图2D）可见LYVE1+淋巴管丛主要位于肾脏