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　　PAFAH基因多态性与1型糖尿病的相关性论文 【摘要】 目的 探讨血小板活化因子乙酰水解酶（PAFAH）基因G994T和G275A多态性及血浆PAFAH水平与1型糖尿病的相关性。方法 选择115例1型糖尿病病人(T1DM组)和106例正常对照者（CON组）作为研究对象,采用PCRRFLP和特异性引物方法测定PAFAH基因G994T和G275A多态性，采用酶水解底物显色法测定血浆PAFAH水平。结果 T1DM组G275A位点GA基因型频率显著高于CON组（χ2=4.667，P 0.05）,A等位基因频率两组差异无显著性（χ2=1.976，P 0.05）。TIDM组G994T位点T等位基因频率和GT基因型频率与CON组比较差异无显著性(χ2=0.148、0.072,P 0.05)。与CON组相比，T1DM组PAFAH活性均明显降低（P=0.000 03）。结论 PAFAH基因275G→A的点突变可能与1型糖尿病相关。 【关键词】 1烷基 2乙酰甘油磷酸胆碱酯酶 糖尿病 1型 基因型 ［ABSTRACT］ Objective To study the relationship betorphism of PAFAH gene, plasma PAFAH level and type1 diabetes mellitus (T1DM). Methods This study consisted of 115 patients er method. Activity of plasma PAFAH in all patients and controls ined by PAFAH Assay kit. Results The frequencies of GA genotype on G275A polymorphism (χ2=1.976,P 0.05). The frequencies of T allele and GT genotype on G994T polymorphism beta PAFAH in T1DM utation of PAFAH gene maybe related to type 1 diabebes mellitus. ［KEY SO 0.5 μL,2.5 μmol/L上下游引物各1 μL;2.5×106 U/L Taq DNA聚合酶0.3 μL,基因组DNA模板 1 μL(25 ng)；加双蒸水补充至20 μL。PCR 反应条件： 94 ℃预变性5 min,然后94 ℃变性30 s,52 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s，循环35次后72 ℃末次延伸10 min。在总体积15 μL酶切反应体系中加入PCR产物8 μL,Bcl Ⅰ酶5 U,55 ℃消化1 h。取酶切产物10 μL上样于30 g/L的琼脂糖凝胶电泳，于紫外线灯下观察结果并拍照，记录基因型。野生型282 bp的PCR产物中不存在Bcl Ⅰ的识别序列，故酶切后只有一条282 bp DNA片段者为野生型（GG纯合型）。但G→A突变后的个体存在TGATCA识别序列，可以被Bcl Ⅰ切开，故有282、113、169 bp等3条带者为突变杂合子（GA杂合型）。随机选择酶切证实野生型和杂合突变型标本PCR产物各两份测序证实酶切结果。②G994T位点：引物序列为上游A 5′CTATAATTTATATCATGCTT3′， 下游B 5′TTTACTATTCTCTTGCTTTAG3′，下游C 5′CTATAATTTATATCATGCTT3′,下游D 5′TCACTAAGAGTCTGAATAAC3′。AB引物扩增片段的长度为160 bp，AC、AD引物扩增片段长度均为108 bp。反应体系：总体积为20 μL，内含10×PCR缓冲液2 μL,10 mmol/L dNTP 0.5 μL,2.5 μmol/L上下游引物各1 μL;2.5×106 U/uL Taq DNA聚合酶0.3 μL,基因组DNA模板 1 μL(25 ng)；加入双蒸馏水补充至20 μL。 PCR扩增反应条件：采用Touchdoin；94 ℃变性30 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s，循环5次；94 ℃变性30 s,52 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s，循环30次；最后72 ℃延伸10 min。每一样本针对不同的特异性引物作3个PCR反应，其中引物A和B特异性扩增G994T位点所在的第9外显子的全长，引物A和C扩增野生型目的片段，引物A和D扩增突变型目的片段。只在野生型泳道108 bp部位出现电泳条带的基因型为野生型纯合子GG;同时在野生型泳道108 bp和突变型泳道108 bp部位出现电泳条带的