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第十二章 荧光分析法 光致发光 物质受到光的照射时，除吸收某种波长的光还会发射出比原来所吸收的波长更长的光的现象。 荧光 物质分子接受光子能量被激发后，从激发态的最低振动能级返回基态时所发射的光。 分子荧光和原子荧光 第一节 荧光分析法的基本原理 电子能级的多重性 M=2s+1 M=1 单重态 M=3 三重态 振动驰豫 激发态各振动能级的分子通过碰撞释放能量，返回同一电子激发态的最低振动能级的过程。 内部能量转换 当两电子激发态能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子由高电子能级转移致低电子能级的过程。 （振动失活在同样多重态间进行，如S2*? S1*） 外部能量转换 激发态分子与溶剂或其它溶质碰撞，以热能的形式释放能量的过程。 体系间跨越 处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程，如S1*? T1* 荧光发射 第一激发单重态的最低振动能级 基态（任一振动能级） 发射荧光的过程约为10-9~10-7s 磷光发射 激发三重态的最低振动能级 基态（任一振动能级） 发射磷光的过程约为10-4~10s或更长 磷光法不如荧光法普遍 （二）荧光的激发光谱和发射光谱 激发光谱（形状与吸收光谱相似） 固定某一发射波长，测定该波长下荧光发射强度随激发波长变化所得的光谱。 荧光强度——激发波长 发射光谱（荧光光谱） 固定某一激发波长，测定荧光发射强度随发射波长变化所得的光谱。 荧光强度——发射波长 定性？ 荧光光谱特征 溶液荧光光谱特征 二、荧光与分子结构 荧光寿命 除去激发光源后，分子的荧光强度降低到最大荧光强度的1/e所需的时间，用?f 表示。 以lnF0/Ft 作图，直线斜率即为1/ ?f。 荧光效率 （二）有机化合物分子结构与荧光的关系 物质发射荧光的两个条件： 强的紫外吸收、 一定的荧光效率 一般地，大多数荧光物质受到激发后，首先经历???*或n??*跃迁，经过振动驰豫或其它无辐射跃迁，再发生?*??或?*?n跃迁，产生荧光。 由于???*比n??*跃迁的强度更大，寿命更短，因此?*??常能产生较强的荧光。 虽然n??*跃迁产生的荧光较???*弱，但在发生n??*跃迁时，紧接着产生体系间跨越，最后从?*三重态回到?基态，产生更强的磷光。 1. 长共轭结构 能产生荧光的物质大都含有芳香环或杂环，或是长共轭双键的脂肪烃 共轭效应增大了荧光物质的摩尔吸收系数，有利于产生更多的激发态分子，从而有利于荧光的产生 2. 分子的刚性 分子的刚性越强，荧光效率越大 3. 取代基 给电子取代基常使荧光强度增大 如：-NH2、-OH、-OCH3、-NHR、-NR2、-CN等 吸电子取代基常使荧光强度降低 如：-COOH、-NO、-NO2、 -SH、 RCO-等 卤素取代基随卤原子序数的增加而荧光下降 1-氯代萘 ?＝0.05 1-溴代萘 ?＝0.002 1-碘代萘 ?＝0.000 可能是由 “重原子效应”所致。在重原子中，能级之间的交叉现象比较严重，容易发生自旋轨道的相互作用，增加了体系间跨越的速度。 （三）荧光试剂 作用：产生强荧光性产物 1. 荧光胺 2. 邻苯二甲醛 3. 1-二甲氨基-5-氯化磺酰萘 4. 测定无机离子的荧光试剂 三、 影响荧光强度的外部因素 温度升高通常会使荧光效率和荧光强度降低 乙醇 -80?C ?=1.00 温度每增加10?C ，荧光效率减小约3% 2. 溶剂 一般地，随极性溶剂的增加，荧光波长长移，荧光强度增强。 奎宁在苯、乙醇和水中的荧光效率的相对大小为1、30、1000。 溶剂粘度减小，分子碰撞机会增加，荧光减弱。 3. 酸度 每一种荧光物质都有其最适宜的pH范围 4. 荧光熄灭剂 荧光熄灭（荧光猝灭） 荧光强度降低的现象 荧光熄灭剂 卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物等等 荧光熄灭原因 分子碰撞失去能量、生成不发光的物质、氧的熄灭作用、自熄灭和自吸收 由于氧分子的顺磁性质，溶液中溶解氧的存在，使激发单重态分子向三重态的体系间跨越速率增加，因而会使荧光效率降低。其它顺磁性物质也有这种作用。 5. 散射光 散射 光子与物质相碰撞，使光子的运动方向发生改变而向不同的方向散射。 瑞利散射 光子和物质分子发生弹性碰撞，只有光子运动方向发生改变的散射光，其波长与入射光波长相同。 拉曼散射 光子和物质分子发生非弹性碰撞，光子运动方向发