不同DNA干系倍体鼻咽癌细胞增殖活性的研究论文.docVIP

　　不同DNA干系倍体鼻咽癌细胞增殖活性的研究论文 .freelal ploidy in nasopharyngeal cancer cells 【Abstract】 Objective To study the proliferation DNA ploidy in nasopharyngeal cellular nucleus.Methods 37 archival cases of nasopharyngeal carcinoma(NPC) al tissue and 3 cancer nests or region (in total 111 samples).The expression of PA and Ki-67 ined by immunohistochemical SP method，DNA stem ploidy and the percent of PA，ki-67 positive cell nuclei agine analyzer.Results pared al ploidy e or carcinoma region (P＞0.05).Conclusion The prolifertion of DNA diploidy and DNA abnormal ploidy is equally in nasopharyngeal. 【Key ploidy； cell proliferation； nasopharyngeal carcinoma；PA； Ki-67 肿瘤细胞DNA含量及其干系倍体与肿瘤复发、转移及预后密切相关，研究表明DNA干系异倍体肿瘤的细胞增殖活性明显高于DNA干系二倍体的［1～3］。鼻咽癌是我国南部省区特异高发的一种恶性肿瘤，在国外比较罕见，有关鼻咽癌DNA干系倍体细胞的增殖活性鲜见报道，本文通过TIGER细胞图像分析仪，对37例鼻咽癌病例的DNA含量与干系倍体状况进行了分析，以PA 、Ki-67的阳性表达率反映细胞增殖情况，研究不同DNA干系倍体鼻咽癌细胞的增殖活性。 1 材料与方法 1.1 病例来源与组织切片的制备 暨南大学医学院附属第一医院1980～2000年鼻咽癌活检归档蜡块，术前均未进行放化疗，选择每个病例包括正常鼻咽上皮组织和三个癌巢或肿瘤区域，共37例，其中男29例，女8例，平均年龄49.1岁（18～82岁）。其中低分化鳞癌23例，泡状核细胞癌7例，未分化癌7例。每个病例制成4μm、8μm连续组织切片。 1.2 免疫组化染色及阳性表达率的计算 PA与Ki-67单克隆抗原均购自美国 DAKO公司，其余试剂均购自北京中山生物技术有限公司。4μm组织切片采用SP法，微波修复，DAB显色，苏木素复染。以PBS代替一抗作为阴性对照；以淋巴结作为PA的阳性对照；以人乳腺癌作为Ki-67的阳性对照。使用TIGER细胞图像分析仪分别计数每个癌巢或肿瘤区域的阳性细胞核数与阴性细胞核数，计算每个癌巢或肿瘤区域的PA与Ki-67阳性表达百分率。 1.3 鼻咽癌细胞核DNA染色及其干系倍体的定量分析 1.3.1 Feulgen染色 4μm、8μm连续组织切片各1张，二甲苯脱蜡15＇×3.5 M HCl室温水解1h，Schiff’s试剂室温染色1h。 1.3.2 细胞图像分析仪的校正 使用显微测微尺标定TIGER细胞图像分析仪的几何标尺，使用中国计量科学院出产的标准密度片标定TIGER细胞图像分析仪的光密度。 1.3.3 鼻咽癌细胞核DNA含量及其干系倍体的定量分析 (1)8μm组织切片上以核距法测量鼻咽正常上皮细胞核与肿瘤细胞核体积等参数，具体方法参见文献［4］。(2)按柯勒氏照明要求调节OLYMPUS BX50显微镜的光源，在物镜（20×NA 0.5）与黑白摄像机之间插入535/35nm的带通滤光片。按TIGER细胞图像分析仪测量光密度的操作要求校正系统基准后，4μm切片（Feulgen染色）上测量正常鼻咽上皮细胞核与3个不同的癌巢或肿瘤区域细胞核的DNA光密度参数，具体方法参照文献［5］。(3)同样方法选取同一病例的正常鼻咽上皮非基底细胞核作对照。(4)TIGER细胞图像分析仪将4μm组织切片上测量所获得的光密度等参数与8μm组织切片上所获得的体积等参数进行计算，获得以单个完整细胞核体积为单位的体积积分光密度（VIOD），以正常上皮组织非基底细胞核的VIOD作内参照，计算每个癌巢或肿瘤区域的DNA指数。 1.3.4 DNA干系倍体的判定标准 以DI值判定DNA干系倍体。DI即DNA指数(DNA index，DI)，是指待测组织细胞核G0/1期DNA含量与正常二倍体细胞核G0/1期DNA含量之比。DI在1.0±0.2范