不同治则方药对快速老化小鼠脑组织细胞因子表达的影响论文.docVIP

　　不同治则方药对快速老化小鼠脑组织细胞因子表达的影响论文 陈云波，王奇，罗荣敬，冯炯，鹿俊磊，程淑意 【摘要】 目的观察不同治则方药对痴呆动物模型脑组织细胞因子表达的影响。方法7月龄快速老化亚系SAMP8小鼠分为痴呆模型组、阳性对照药脑复康组、六味地黄汤组、四君子汤组、归脾汤组、当归芍药散组等6个组；抗快速老化亚系SAMR1作为正常对照组。给药4周后，用液相蛋白芯片（Luminex）技术同时测定脑组织中的10种细胞因子（GM-CSF，IFN-γ.freelers disease, AD）是目前公认的危害人类健康的主要疾病之一，已成为威胁中国老年人健康，仅位于心脏病、肿瘤、卒中之后的第四大疾病。由于AD病理变化的复杂性，其发病机制尚未揭示［1］，尽管世界各国在寻找AD有效治疗药物的研究中投入了大量的人力和物力，但成果却十分有限。作为天然药物的中药尤其是复方，在防治老年性疾病方面则有着丰富的理论和实践经验以及潜在的优势，因此，阐明中药复方防治AD的药理机制，筛选和研制能延缓AD进程、提高患者生活质量的中药新药将具有重要的现实意义和广阔的应用前景。 本实验研究拟采用新引进的液相蛋白芯片（Luminex）技术［2］，研究不同治则方药对痴呆动物模型脑组织细胞因子的影响。首先在文献检索和预实验的基础上，初筛出10种与AD免疫炎症病理反应相关的细胞因子,它们是粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（Granuloyte-macrophage colony stimutaing factor, GM-CSF）、γ-干扰素（Interferon γ, IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（Tumour necrosis factor-α, TNF-α）、白介素-1β（Interleukin-1β, IL-1β）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-5（IL-5）、白介素-6（IL-6）、白介素-10(IL-10)、白介素-12(IL-12)；然后用4种不同治则的经典方药（即六味地黄汤、归脾汤、当归芍药散和四君子汤）对痴呆动物模型进行治疗；应用Luminex检测技术，比较不同治则方药各自不同蛋白表达靶点（脑组织的皮质和海马）的细胞因子含量变化，从炎症与免疫反应方面阐述中药复方防治AD的药理机制，为其临床应用提供实验依据。 1 材料与仪器 1.1 动物 SPF级7月龄雄性快速老化小鼠（senescence accelerated mouse，SAM）购自天津中医药大学第一附属医院老年脑病研究室动物中心（动物质量合格证号：06F1022），其中快速老化亚系SAM-prone/8（SAMP8）小鼠84只，抗快速老化亚系SAM-resistant/1（SAMR1）小鼠15只，体质量约20 g。 1.2 药品和试剂 六味地黄汤（熟地、山萸肉、山药、泽泻、丹皮、茯苓按8∶4∶4∶3∶3∶3的比例配比）；归脾汤（白术、茯苓、黄芪、龙眼肉、酸枣仁、木香、炙甘草、当归、远志、人参按3∶3∶4∶4∶4∶2∶1∶3∶2∶2的比例配比）；四君子汤（人参，白术，茯苓，炙甘草按1∶1∶1∶1的比例配比）；当归芍药散（当归，芍药，川芎，泽泻，白术，茯苓按3∶16∶8∶8∶4∶4的比例配比）等4种方药药材由广东省中医院药房提供，按煎煮标准配制，煎煮浓缩至所需浓度（含生药为1 g/ml）；脑复康片（吡拉西坦片 Piracetam Tablets），广东华南药业有限公司产品，批号：051103；氯化钠灭菌注射液，广州中医药大学附属第一医院产品，批号：T051123； Mouse Multi-Cytokine Detection System2 Luminex检测试剂盒，Upstate公司产品，批号：0604026780。 1.3 仪器 液相芯片分析平台（美国Luminex公司，型号Luminex100）；超低温冰箱（美国Forma公司，型号8525）；台式高速冷冻离心机（德国Beckman公司，型号GS-15R）；电子天平（日本Shimadzu公司，型号AGE120）；纯水器（美国Millipore公司，型号Milli-Q）。 2 方法 2.1 分组 84只7月龄SAMP8小鼠按区组随机法分为模型组、脑复康组、六味地黄汤组、四君子汤组、归脾汤组、当归芍药散组，每组14只；15只SAMR1作为正常对照组。以各种药物的临床用量作为实验小鼠的用药量，根据体重剂量浓度的换算公式［3］换算成小鼠标准体重剂量，按下列分组连续灌胃给药4周。 2.2 给药 ① 正常对照组：每天给予生理盐水灌胃，0.2 m1/次。 ② 模型组：每天给予生理盐水灌胃，0.2 m1/次。 ③ 六味地黄汤组（0.2 g/20 g）、四君子汤组（0.09 g/20 g）、归脾汤组（0.2