不同浓度尿酸和胰岛素对猪近端肾小管上皮细胞株cAMP水平及Na+论文.docVIP

　　不同浓度尿酸和胰岛素对猪近端肾小管上皮细胞株cAMP水平及Na+论文 孙珲，李晓苗，宋白利，刘新平，药立波，姬秋和 【关键词】 尿酸；胰岛素；肾小管,近端/细胞学；环AMP；Na+ 【Abstract】 AIM: To observe the effect of metabolic correlation factors on ionic transport and cell apoptosis of proximal renal tubular epithelial cells at the cellular level through observing the effects of uric acid and insulin of different concentrations on cAMP and Na+K+ATPase in proximal renal tubular epithelial cell line LLCPK1. METHODS: Proximal renal tubular epithelial cells (LLCPK1) from pig edium supplemented mol/L and insulin at 0, 10-9, 10-8, 10-7 mol/L; and then anner, but Na+K+ATPase activity, ［K+］ dropped in highconcentration insulin groups,.freel ion in cell, ight lead to cell dropsy and even induce apoptosis. In addition, high concentration of uric acid and insulin could do damages to LLCPK1 coordinately. 【Keyal/cytology; cyclic AMP; Na+K+exchanging ATPase 【摘要】 目的： 观察不同浓度尿酸和胰岛素对猪近端肾小管上皮细胞株（LLCPK1）细胞内环腺苷酸（cAMP）水平和Na+K+ATP酶活性的改变，探讨代谢相关因素在细胞水平对近端肾小管上皮细胞的离子转运和细胞凋亡影响. 方法： 以LLCPK1为研究对象.freelmol/L和胰岛素浓度为0, 10-9, 10-8, 10-7 mol/L培养24 h条件下，LLCPK1细胞内cAMP水平、Na+K+ATP酶活性的改变以及离子转运情况. 结果： 0.1, 0.2和0.4 mmol/L尿酸刺激24 h, LLCPK1的cAMP水平、细胞Ca2+, Na+浓度升高，而Na+K+ATP酶的活性、K+浓度下降；胰岛素在高浓度时引起细胞内游离Ca2+, Na+浓度增高，而cAMP水平，Na+K+ATP酶活性及K+浓度下降. 结论： 尿酸和胰岛素均对LLCPK1细胞具有明显的影响，可能与代谢综合征时肾脏功能改变的发生或保护机制有关. 【关键词】 尿酸；胰岛素；肾小管，近端/细胞学；环AMP；Na+K+交换ATP酶 环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate, cAMP）作为激素的第二信使理论后，引起人们的关注,cAMP通过调节酶的活性，对细胞的代谢起着重要的调节作用. 而Na+K+ATP酶是位于细胞膜上的一种糖蛋白，与ATP的分解和细胞内外Na+,K+离子的转运密切相关;它也是一种十分重要的生物酶，在物质的传送、能量的转换以及信息传递方面具有重要作用［1］. 近年来有关细胞cAMP水平和Na+K+ATP酶活性的研究报道较多，而对肾脏研究的报道较少. 我们观察了不同浓度尿酸和胰岛素对猪近端肾小管上皮细胞cAMP水平和Na+K+ATP酶活性的改变，探讨代谢相关因素在细胞水平对近端肾小管上皮细胞的离子转运和细胞凋亡的影响. 1材料和方法 1.1材料猪的近端肾小管上皮细胞株（LLCPK1，北京解放军总医院肾脏内科付博博士馈赠）；低糖DMEM（美国GIBCO公司产品）；100 mL/L胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；胰蛋白酶EDTA（美国GIBCO公司产品）；2， 5二苯基恶唑(PPO)，1， 4 双二(5苯基恶唑基)苯(POPOP)(上海化学试剂二厂产品)；MgSO4, KCl, EDTA, NaCl，三氯醋酸，TrisHCL缓冲液(pH 7.4)； NA+K+ATP酶试剂盒（南京建成生物工程研究所）；cAMP测定试剂盒（中国原子能科学研究院产品）. 1.2方法 1.2.1细胞培养和处理猪近端肾小管上皮细胞株(LLCPK1)用含100 mL/L胎牛血清的DMED放置CO2孵