中药药理、中药免疫研究和中兽药研发工作. 当归不同药用部位水提液体外清除自由基作用研究论文.docVIP

　　中药药理、中药免疫研究和中兽药研发工作. 当归不同药用部位水提液体外清除自由基作用研究论文 华永丽，郭延生，邓红娟，程越山，曲亚玲，魏彦明 【摘要】 目的研究生当归、当归头、当归身、当归尾的水提取液体外对羟自由基(·OH)和氧自由基(O2-·)的清除作用。方法应用分光光度法测定不同当归水提液对Fenton反应产生的羟自由基(·OH)和邻苯三酚自氧化产生的氧自由基(O2-·)的清除能力。结果当归不同部位水提液在受试浓度范围内对羟自由基和氧自由基有明显的抑制作用，随当归及其不同部位水提液浓度的增加，抑制率明显升高.freeletry. ResultsThe results sho different parts of Radix Angelicae Sinensis in vitro had significant scavenging effects on hydroxyl radical. Furthermore , the extracts exhibited a significant concentration-dependent elimination. ConclusionThe different parts of Radix Angelicae Sinensis have significant antioxidative actions in vitro. There exist significant differences among these different parts of Radix Angelicae Sinensis on scavenging hydroxyl radical and oxygen free radical. Key l，85 ℃超声-微波协同提取2次，每次30 min。合并两次提取液，减压浓缩至质量浓度1 g/ml。4 ℃保存备用。 2.2 羟自由基体系参照Fenton反应的方法建立反应体系模型4,5，采用固定反应时间法6,7，在相同体积的反应体系(6 mmol/L的H2O2 1 ml，6 mmol/L的Fe2+ 1 ml，6 mmol/L的水杨酸-乙醇溶液 1 ml)分别加入不同浓度的生当归、当归头、当归尾和当归身水提液1 ml，设置5个浓度组(质量浓度分别为5，10，20，40，80 mg/ml)，每个浓度设10个平行管。以蒸馏水为参比，在510 nm处测量各浓度下的吸光度，通过公式计算其清除率。以L-抗坏血酸为阳性药物对照，质量浓度分别为0.15，0.20，0.25，0.30，0.35 mg/ml共5个浓度组，每个浓度设10个平行管。 公式：清除率(%)=Ai-(Aj-Ad)/Ai×100% Ai为空白对照液的吸光度;Aj为加入药物溶液后的吸光度;Ad为不加显色剂H2O2药物溶液本底的吸光度。 2.3 氧自由基体系8,9采用邻苯三酚自氧化法10～12：邻苯三酚在弱碱性介质中自氧化分解产生O2-·，利用O2-·清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在325 nm处的吸收峰受到抑制这一特点设计实验，实验分为对照管和加药管，对照组管设5个平行管，分别加入50 mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液(pH 8.2，含1 mmol/L 二乙基三氨基五乙酸)4.5 ml，加入4.2 ml双蒸水，混匀后25 ℃水浴保温20 min，取出后立即加入25 ℃水浴中预热的6 mmol/L的邻苯三酚0.3 ml (以10 mmol/L HCl代替邻苯三酚作为空白)，混匀后立即倒入比色杯，于325 nm处每隔30 s测A值1次，共测5 min，计算对照管溶液吸光度随时间的变化率。加药组设5个平行管，在加入邻苯三酚前先加入1.0 ml当归提取液(设质量浓度分别为25，50，100，200 mg/ml共4个浓度梯度)，再加入3.2 ml双蒸水，混匀后25 ℃水浴保温20 min，取出后立即加入在25 ℃水浴中预热的6 mmol/L邻苯三酚0.3 ml，混匀后立即倒入比色杯，于325 nm处每隔30 s测A值1次，共测5 min，计算当归及其炮制品水提取液吸光度随时间的变化率。以空白管标零。以L-抗坏血酸为阳性药物对照，设质量浓度分别为0.02，0.04，0.08，0.16 mg/ml共4个浓度组，每个浓度设5个平行管。 公式：清除率(%)=(⊿A-⊿A0)/⊿A×100% ⊿A：表示对照管邻苯三酚自氧化变化速率;⊿A0：表示加药管邻苯三酚自氧化变化速率)便能测定被测物对O2-·的清除作用。 2.4 数据统计处理用SPSS13.0统计软件进行方差分析、回归分析和线性相关，测定结果以±s表示，以(P 0.05)为检验水准。 3 结果 3.1 当归不同药用部位水提液对羟自由基的清除