主成分分析对佛手最佳产地的探讨论文.docVIP

　　主成分分析对佛手最佳产地的探讨论文 崔红花 高幼衡 蔡鸿飞 魏志雄 何巧君 【摘要】 目的分析不同产地佛手中生物活性成分分布规律，探索佛手最佳产地的优选方法，以确定最佳产地。方法采用三维高效液相色谱法，梯度洗脱，测定17批不同产地佛手中5种生物活性成分(柠檬油素、67二甲氧基香豆素、橙皮苷、5羟基7甲氧基8异戊烯基香豆素、6羟基7甲氧基香豆素)的含量，并对其进行主成分分析。结果所建模式合理，具有一定的可行性和可靠性，为探讨佛手最佳产地提供了一种新的方法。结论佛手最佳产地以广东肇庆为最佳。 【关键词】 佛手/化学 主成分分析 色谱法 高压液相 佛手为芸香科柑桔属植物佛手Citrus medica L.var.sarcodactylis Sa公司，色谱用);水为自制超纯水;乙酸乙酯、甲醇、乙醇(广州化学试剂厂，提取用)均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 流动相及梯度洗脱条件的选择 化合物3～5结构中均含有酚羟基，化合物1、2中含有含氧基取代，因而它们在分析时很容易产生拖尾，使峰变宽，分离度下降，因此要选择偏酸性的流动相，这样才能减少色谱峰的拖尾，改善峰形,.freel及315～330nm(loge4.2)处可见2个强吸收峰，同时在250～270nm(loge3.8～3.9)处有1个弱吸收峰(见图1)。但化合物2、5为6，7二氧代香豆素，它们有230nm、340～350nm2个强吸收峰，同时有260nm、300nm2个相等强度的次强峰，它们表现出了类似的紫外吸收曲线，在230nm附近有1个最大吸收峰。化合物1和2在210nm附近有最大吸收，但因为是末端吸收，故吸收波长分别确定为327nm、230nm。化合物3为二氢黄酮苷，所以呈现出典型二氢黄酮类化合物的2个吸收带(带Ⅰ和带Ⅱ)，即具有强的带Ⅱ吸收(270～295nm)，而带Ⅰ以肩峰或低强度吸收峰出现。结果见图1。 2.3 色谱条件 Kromasil C18分析柱(250mm×4.0mm，5μm);流动相为A(乙腈)5g/L冰醋酸水溶液。线性梯度洗脱时间程序：0～3min，A的比例为5%;3～8min，A的比例由5%升高到10%;8～48min，A的比例由10%升高到27%;48～63min，A的比例由27%升高到55%;63～68min，A的比例由55%升高到100%;68～75min，A的比例为100%。体积流量：1mL/min;检测波长：柠檬油素为327nm，6，7二甲氧基香豆素为230nm，橙皮苷为290nm，5羟基7甲氧基8异戊烯基香豆素为212nm，6羟基7甲氧基香豆素为229nm;柱温30℃;分析时间为75min。对照品和样品的色谱图见图2。 2.4 样品溶液的制备 2.4.1 对照品溶液的制备 精密称取柠檬油素、6，7二甲氧基香豆素、橙皮苷、5羟基7甲氧基8异戊烯基香豆素、6羟基7甲氧基香豆素对照品适量，溶于甲醇配制成浓度依次为2.04、0.60、0.64、0.62、0.30mg/mL的对照品溶液，备用。 2.4.2 供试品溶液的制备 精密称取佛手药材粉末(过80目筛)1.5g于索氏提取器中，加体积分数75%乙醇70mL，提取4h，滤过，蒸干，残渣以甲醇溶解并定容至10mL，微孔滤膜滤过，备用。 2.5 线性关系的考察 分别精密吸取标准溶液，注入高效液相色谱仪，以进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，结果见表2。 2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液，连续进样5次，测定5个对照色谱峰的峰面积，并计算其sR值，测得sR在0.47%～2.69%范围内。 2.7 重现性试验 取同一批号供试品5份，按2.4.2表2 样品线性关系项下方法制备供试品溶液，以2.3项下色谱条件测定各色谱峰峰面积的sR值，测得sR在1.21%～4.47%范围内。 2.8 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别在0、2、4、6、10h进样，结果测得各色谱峰峰面积的sR范围在0.36%～3.17%。 2.9 加样回收率试验 精密称取已知柠檬油素、6，7二甲氧基香豆素、橙皮苷、5羟基7甲氧基8异戊烯基香豆素、6羟基7甲氧基香豆素含量的供试品粉末(80目)，定量加入柠檬油素、6，7二甲氧基香豆素、橙皮苷、5羟基7甲氧基8异戊烯基香豆素、6羟基7甲氧基香豆素对照品适量，按2.4.2项下方法进行制备操作，测定各化合物的加样回收率，测得加样回收率范围为95.47%～103.69%。 2.10 含量测定 精密吸取样品溶液20μL连续进样2次，测定峰面积，计算化合物1～5的含量，测定结果见表3。表3 佛手样品中化学成分含量测定结果 2.11 主成分分析 在数据分