产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶基因型的研究论文.docVIP

产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶基因型的研究论文.doc

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产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶基因型的研究论文.doc

  产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶基因型的研究论文 【摘要】 目的 探讨产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶(extended spectrum βlactamases,ESBLs)类型及耐药机制。方法 采用纸片琼脂扩散法筛选36株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs菌株,接合传递实验、质粒谱分析、PCR检测耐药基因和DNA序列分析产ESBLs菌株的表型和基因型。结果 双纸片扩散法证明有2株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs,美国株E.coli 5 nonO157:H7和中国株E.coli 27 O157:H7对头孢他啶等第三、第四代头孢菌素和氨基糖苷类抗生素耐药,并能通过5.8kb的质粒传递给受体菌。PCR检测含有blaTEM基因。DNA同源分析表明861bp的blaTEM DNA片段与blaTEMI DNA片段同源。结论 产志贺毒素大肠埃希菌美国株和中国株产生相同类型的ESBLs,表现出对第三、第四代β内酰胺酶类抗生素耐药。 【关键词】 产志贺毒素大肠埃希菌 超广谱β内酰胺酶 基因型 Study on the genotype of extended spectrum betalactamases among ABSTRACT Objective To investigate the genotype and antimicrobial mechanism of extended spectrum betalactamases among Shiga toxinproducing E.coli (STEC). Methods Antibiotic susceptibility id profile, PCR and DNA sequencing ples, there t American and E.coli 27 O157:H7 from China, and they both inoglycosides and the third generation cephalosporins such as ceftazidime. Double disk test shoid of 5.8kb. TEM βlactamasesencoding gene ent of blaTEM DNA had a high homology America and China carry the same genotype ESBLs, ay be the major resistance mechanism against the third and fourth generation cephalosporins. KEY 和SHV型衍生的β内酰胺酶,还包括PER型酶、CTX型酶及VEB1等型酶[3]。ESBLs编码基因具有可转移性,随质粒在同种或不同种细菌间传播,导致耐药基因快速传播。国内、外不同地区肠杆菌科分离株所产生ESBLs的类型不一,以TEM型和SHV型多见,而STEC产ESBLs菌株流行情况国内、外均未见报道。本文应用细菌学与分子生物学方法研究STEC菌株ESBLs的表型及基因型,探讨STEC产ESBLs的基因类型及耐药机制。 1 材料与方法 1.1 菌株来源 STEC共36株,其中20株为美国分离株,16株为中国分离株。质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、金葡菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853由吉林大学基础医学院病原生物学教研室提供。 1.2 试剂 实验用MH培养基和药敏纸片购自Oxoid公司;药敏纸片(μg/片)包括:氨苄西林(AMPC)10,头孢曲松(CRO)30,头孢他啶(CAZ)30,头孢他啶/克拉维酸(CAZ/CA)30/10,头孢噻肟(CTX)30,头孢噻肟/克拉维酸(CTX/CA)30/10,氨曲南(AZ)30,氨苄西林/舒巴坦(AMPC/SB)10/10,阿莫西林/克拉维酸(AMPC/CA)10/10,亚胺培南(IMP)10,氯霉素(CHL)30,庆大霉素(GM)10,四环素(TC)30,环丙沙星(CPLX)5,复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)1.2/23.7,红霉素(EM)15,链霉素(SM)10和阿米卡星(AMK)50;Taq DNA聚合酶、dNTP混合液、DNA分子标准参照物购自TaKaRa。PCR产物纯化、凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒购自QIAGen公司。 1.3 仪器 GeneAmpR PCR System2700 Applied Biosystem(USA),DYYⅢ型水平电泳仪(北京市六一仪器厂),UV H培养基进行转接合子的筛选。进行转接合子耐药表型的鉴定,碱裂解法直接提取细菌转接合子DNA。 1.8 PC

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