ELISA法测辣椒粉中的苏丹红1含量.docVIP

江西科技师范大学 生物工程综合实训 题 目： ELISA法测定辣椒粉中的苏丹红Ⅰ含量 院 （系）： 生命科学学院 班 级： 10级生物工程1班 学生姓名： 董潘飞 学 号： 指导老师： 裘雪梅 2013年 7月 2 日 ELISA法测定辣椒粉中的苏丹红含量 摘要：本实验是采用ELISA方法测定辣椒粉中的苏丹红含量。实验通过对苏丹红进行修饰，与载体蛋白交联得到免疫抗原和包被抗原并用牛奶封闭，在酶标二抗的连接下加入底物显色液，用2mol/L的H2SO4终止，并测定其OD450值，得到最佳实验结果为：当抗原浓度为2ug/ml，抗体浓度为1:2000时效果最佳。并用此修饰的苏丹红对样品辣椒粉进行测定其苏丹红含量。 关键词：ELISA；苏丹红；辣椒粉 Abstract: This experiment was measured by ELISA Sudan content in the chili powder.Experimental modified by Sudan Ⅰ obtained with a carrier protein cross-linking to the immunizing antigen and envelope antigen and blocked with milk, the chromogenic substrate solution is added to the under HRP resistance connection termination with 2mol/L H2SO4, and measuring OD450 values, the best experimental results as follows: When the concentration of antigen 2ug/ml, antibody concentration of 1:2000 when the best results. Sudan Ⅰ and modified sample chili powder Determination of Sudan Ⅰ content. Key Word : ELISA；sudan I；chili powder 引言 苏丹红是一种化学染色剂，并非食品添加剂。它的化学成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。苏丹红属于化工染色剂，主要是用于石油、机油和其他的一些工业溶剂中，目的是使其增色，也用于鞋、地板等的增光。 又名“苏丹”。 苏丹红I的化学名称为1-苯基偶氮-2-萘酚， 是一种遗传毒性致癌物质[1]，可引起肝脏、膀胱和脾脏等脏器的肿瘤，全球多数国家都禁止将其用于食品生产。苏丹红1号色素是一种常用于溶解剂、机油、蜡和鞋油等产品染色的化学制剂。2002年研究人员发现它们能造成人类肝脏细胞的DNA突变，显现出可能致癌的特性。苏丹红I还具有遗传毒性和致敏性，可引起人体皮炎。苏丹红I的代谢产物是苯胺和1-氨基-2萘酚，其中胺在体内外均具有遗传毒性，被IARC列为三类致癌物 酶联免疫吸附测定法(ELISA）采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。灵敏度可达10-9，ELISA方法还有价廉、简便的特点，它已经广泛应用于食品检测领域中。本实验就是用LISA方法测定辣椒粉中苏丹红号含量。1 试剂与仪器 1.1主要试剂 1μg/ml抗原，奶粉，1×PBS，10×PBS，吐温-20，1:1000一抗，4mg/mL抗原，1:3000酶标二抗，底物显色液（底液A+TMB），2mol/L H2SO4，洗液，辣椒粉，纯甲醇，200ng/mL苏丹红，标准样品等。 10×PBS配制：0.1MpH7.480g NaCl、29g Na2HPO4·12H2O、2g KH2PO4、2g KCl 蒸馏水定容至1000Ml。 A液：柠檬酸1.05g 乙二胺四乙酸·二钠（EDTA－2Na）0.18g超纯水定容至300mL，加溶有0.25gTMB200mL丙酮。 B液：冰乙酸钠2.45g过氧化脲0.5g冰乙酸3mL 加蒸馏水定容至500mL， 配置显示液时A＋B 1:1。