TagMan探针逆转录—实时荧光定量PCR技术测定喉癌组织中EGFR+mRNA含量.pdf

浙江大学专业学位硕士论文 收集2003年6月至2005年9月在浙江大学医学院附属第二医院耳鼻嚼喉科住院 手术的部分喉癌病例的切除组织标本。共32例，均为男性，年龄40-73岁，中位年龄 为57．5岁。病理诊断均为鳞状细胞癌，包括低分化4例，中分化19例，高分化9例。 期5例，II期12例，Ill期8例，IV期7例。所有病例均为初发患者，术前未接 受放化疗。从手术切除标本中切取小块癌组织和癌旁阴性切缘以外的喉黏膜组织，置 于预先高压灭菌的的冻存管中，立即置于液氮中并保存于一80℃冰箱。 2方法 以Primer Software Express v2．0软件设计EGFR的引物探针。构建重组pG肼一 TEasy／EGFR质粒，测序鉴定后将质粒按10倍浓度梯度稀释成标准品。 所有组织样本以Trizol法提取组织中总RNA，常规方法逆转录，合成eDNA，将组 织样本cDNA和按lO倍浓度梯度稀释的质粒DNA’pG肼_TEasy／EGFR标准品 统2．0版上以最佳PCR条件进行EGFR检测，同时以GAPDH为内参照。 3数据分析 以相对定量法计算BGFRⅡ棚A含量，EGFR 值-GAPDH的cT值)。所得数据pAsPSS12．O统计软件包进行处理，经正态性检验，数据 呈偏态分布，故结果用中位数(四分位数间距)，日口M(QR)表示。以Wilcoxon秩和检验进 行差异显著性检验。 2 浙江大学专业学位硕士论文 结果 重删T mRNA含量的方法构建 预期完全一致。应用TagMan探针实时荧光定量PcR技术测定EGFR 成功。喉癌组织中BGFRtuRNA相对含量中位数为0．025，其四分位数间距为0．076；癌旁 组织学正常喉黏膜的EGFR删A相对含量中位数为0．008，其四分位数间距为0．027 (只O．01)。 结论 1．喉癌组织EGFR mRNA含量较癌旁组织学正常喉黏膜组织明显增高，mRNA水平的扩增 可能是喉癌组织EGFR上调表达的一个重要原因。 mRNA水 2．TagMan探针逆转录一实时荧光定量PCR技术可作为—种喉癌组织中EGFR 平定量测定的新方法，具有更客观、准确、高通量等优点。 关键词： 喉癌表皮生长因子受体聚合酶链反应荧光定量 浙江大学专业学位硕士论文 GrowthFactor QunntilafiveAnalysisofEpidermal Receptor Cartinoma Tune mRNA缸Laryngealby]l毛ffvellSeTranscription-Real Chel Postgraduate Jia Tutor Beibei Yang Abstract The activationof factor overexpression epidermalgrowth receptor and面印删me (E