一株杜仲内生真菌发酵产物的抗氧化活性研究.pdf

摘要 摘 要 本研究以药用植物杜仲Eucommia ulmoides Oliver为研究材料，进行了内生真菌 抗氧化活性菌株的分离、筛选和鉴定，对其中活性最强的菌株进行了发酵产物的纯 化；研究了其发酵产物抗氧化活性的变化和稳定性；研究了对超氧阴离子自由基、 羟基自由基和有机自由基DPPH 的清除效果；研究了体外抗脂质过氧化和抑制氧化溶 血的药理作用；以果蝇为模型研究了对生物体持水能力、耐饥饿能力和寿命影响的 药效作用。结果如下： 1、采用组织分离法，从杜仲叶片组织中分离得到一批内生真菌菌株，对其中的 232株内生真菌采用总抗氧化能力测试盒进行活性菌株的筛选，从中选出抗氧化活性 较高的一株菌No.173 ，根据形态分类和rDNA ITS序列分析对菌种进行了鉴定，确定 为球毛壳菌Chaetomium globosum Kunze 。 2 、采用总抗氧化能力测试盒评价了6种大孔吸附树脂（AB-8树脂、X-5树脂、 D101 树脂、NKA-9 树脂、HPD-100 树脂、HPD-600 树脂）对杜仲内生球毛壳Ch. globosum菌株No.173发酵液提取物的纯化效果，结果显示经NKA-9树脂纯化的提取 物的总抗氧化活性极显著高于其他5种树脂（P0.01 ），NKA-9树脂纯化得到提取物 的总抗氧化活性几乎比纯化前提高了一倍（从20.70 U/mL提高至39.23 U/mL ）。 NKA-9树脂对杜仲内生球毛壳Ch. globosum菌株No.173发酵液提取物有很好的纯化 效果，所以被选用作为纯化树脂。 3、采用铁氰化钾还原力测定法、β-胡萝卜素/亚油酸模型和碘量法评价了杜仲内 生球毛壳Ch. globosum菌株No.173 发酵液提取物的抗氧化活性及其稳定性；采用 Folin-Ciocalteu法测定杜仲内生球毛壳Ch. globosum菌株No.173发酵液提取物的总多 酚含量。结果表明，其抗氧化能力与Vc基本相当，且抗氧化活性稳定性较好；多酚 含量为(255.53±1.38) mg/g （以没食子酸计），且多酚含量的变化与抗氧化活性具有相 关性，是主要的抗氧化活性成分。 4 、采用DPPH实验、光照核黄素体系和亚甲蓝光度法评价杜仲内生球毛壳Ch. globosum 菌株No.173 发酵液提取物清除有机自由基（DPPH ）、超氧阴离子自由基 （O2-·）和羟基自由基（·OH）的能力。结果表明，杜仲内生球毛壳Ch. globosum菌 株No.173发酵液提取物有很好的清除自由基的能力，在相同浓度下，清除DPPH 自由 基、超氧阴离子自由基（O2-·）的效果好于阳性对照（Vc ），而清除羟基自由基（·OH） 的能力则较差。 5、对杜仲内生球毛壳 Ch. globosum 菌株 No.173 发酵液提取物进行了抗脂质过 氧化和抑制小鼠红细胞氧化溶血的研究。结果表明，杜仲内生球毛壳 Ch. globosum 菌株 No.173 发酵液提取物对小鼠肝、肾、心和脾组织的脂质过氧化的抑制效果随着 I 摘要 发酵液提取物浓度的增加而不断增强。1 mg/mL 的浓度对小鼠心和脾两种组织脂质 自发过氧化的抑制率分别为71.55 %和 71.68 %，对H O 诱导的肝组织脂质过氧化 2 2 的抑制率达到 92.50 % ；0.3 mg/mL 的浓度对小鼠红细胞自氧化溶血的抑制率为 68.48 %，对H O 诱导的小鼠红细胞氧化溶血的抑制效果则随着浓度的提高而增强； 2 2 0.75 mg/mL 浓度的抑制率达到 96.12 % 。 6、以杜仲内生球毛壳 Ch. globosum 菌株 No.173 发酵液提取物喂食果蝇，研究 对果蝇持水能力、耐饥饿能力的影响以及