【2017年整理】转录与基本知识003精简.ppt

第三章 生物信息的传递（上 ）——RNA的生物合成;遗传信息传递的 中心法则; RNA /DNA Structure;;;;;紫外分光光度计 A260/A280和A260/A230的含义;在RNA聚合酶的催化下，以一段DNA链为模板合成RNA，从而将DNA所携带的遗传信息传递给RNA的过程称为转录（transcription）。 经转录生成的RNA有多种，主要的是rRNA，tRNA，mRNA，snRNA(small nuclear RNA和HnRNA等。;;复制和转录的区别 ;转录是基因表达的中心环节;第一节 RNA转录合成的特点; ;能够转录RNA的那条DNA链称为模板链(template strand) ，也称作反义链。 与模板链互补的另一条DNA链称为编码链(coding strand)，也称为有意义链。 ;5? 3?;5′···GCAGTACATGTC ···3′;RNA转录合成时，以DNA作为模板，在RNA聚合酶的催化下，连续合成一段RNA链，各条RNA链之间无需再进行连接。;RNA转录合成时，只能向一个方向进行聚合，所依赖的模板DNA链的方向为3→5，而RNA链的合成方向为5→3。 ;RNA转录合成时，只能以DNA分子中的某一段作为模板，故存在特定的起始位点和特定的终止位点。 特定起始点和特定终止点之间的DNA链构成一个转录单位，通常由转录区和有关的调节顺序构成。 ;第二节 参与转录合成的酶和蛋白因子; ;这是一种不同于引物酶的依赖DNA的RNA聚合酶（DNA dependent RNA polymerase，DDRP）。 该酶在单链DNA模板以及四种核糖核苷酸存在的条件下，不需要引物，即可从5‘→3’聚合形成RNA。 ;原核生物中的RNA聚合酶全酶由五个亚基构成，即?2???。 ?亚基与转录起始点的识别有关，在转录合成开始后被释放；余下的部分（?2??）被称为核心酶，与RNA链的聚合有关。 ;核心酶 (core enzyme);原核生物RNA聚合酶亚基的功能;单因子RNA 聚合酶;真核生物中的RNA聚合酶可按其对?-鹅膏蕈碱的敏感性而分为三种，它们均由10~12个大小不同的亚基所组成，结构非常复杂，其功能也不同。 ;在真核生物中，转录的起始过程较为复杂，现已发现数百种蛋白因子与RNA转录合成有关。 凡是与基因表达调控相关的蛋白因子统称为反式作用因子（transacting factor）。;在反式作用因子中，直接或间接参与转录起始复合体的形成的蛋白因子被称为转录因子（transcriptional factor, TF）。 不同的RNA聚合酶存在相应的转录因子，如与RNA聚合酶Ⅱ相关的转录因子包括 TFⅡA，TFⅡB，TFⅡD，TFⅡE，TFⅡF，TFⅡH等。;真核生物RNA聚合酶Ⅱ转录因子及其功能; 协助RNA聚合酶识别终止信号的辅助因子（蛋白质）则称为终止因子 (termination factor)。有的终止信号的作用可被特异的因子所阻止，使RNA聚合酶得以越过终止子继续转录，这称为通读(readthrough)，这类引起抗终止作用的蛋白质称为抗终止因子(antitermination)。 原核生物中的终止因子?蛋白是一种六聚体的蛋白质，亚基的分子量为50kd。 ?蛋白能识别转录终止信号，并与RNA紧密结合，导致RNA的释放。 ;第三节 RNA转录合成的过程;真核生物和原核生物转录的差别;RNA合成过程;（一）转录起始;在原核生物中，若干功能相关的结构基因常常串联在一起，由其上游的同一调控序列进行调控，这种基因的组织形式称为操纵子（operon）。;DNA分子中参与转录调控的序列统称为顺式作用元件（cis-acting element）。 原核生物转录起始时，首先由RNA聚合酶中的?因子识别转录起始点，并促使核心酶结合形成全酶复合物。;位于基因上游，与RNA聚合酶识别、结合并起始转录有关的一些DNA调控序列被称为启动子（promoter）。 启动子序列通常由一些带共性的保守序列构成。; 利用足迹法(footprint)和DNA测序法可以确定启动子的序列结构。 原理:DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解，在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区)，从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移出与蛋白质结合的DNA后，又可测出被结合处DNA的序列。 ;;开始转录;原核生物转录起始区的一致性序列;大肠杆菌启动子共有序列的功能;被RNA聚合酶辨认的区段就是位于转录起始点-35区的TTGACA序列。 RNA聚合酶与该区结合后，即滑动至-10区的TATAAT序列（Pribnow盒），并启动转录。 ;RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合