8反相层析.pptVIP

江南大学医药学院 反相层析 概述 原理 反相层析介质 反相层析的流动相 层析技术 应用 1 概述 反相层析法的建立追述到1950年，Howard和Martin用正辛烷作为固定相，水作为流动相进行石蜡油的液-液层析分离，并且把这种方法命名为反相层析 所谓“正相”或“反相”，主要是指固定相和流动相的相对极性大小，反相层析因与传统分配层析刚好相反而得名，其固定相非极性强而流动相极性相对较高，样品中组分被洗脱的顺序是极性较高的组分先流出，极性较低的后被洗脱 反相层析流动相的溶剂洗脱强度变化范围大，使溶质保留值的差别可以达到1-2个数量级，因此反相层析可分离的溶质范围很宽，从极性较大的寡肽、小分子有机物到疏水性较强的生物大分子 反相层析能够区分分子在疏水性质方面的细微差异而有效地进行分离，具备高分辨率的特性 2 原理 2.1 反相层析作用原理 疏溶剂理论（solvophobic theory） 反相层析机理普遍被接受的是Horvath于1976年提出的疏溶剂理论，假设反相层析介质是表面均匀密集的覆盖着非极性配基的颗粒，溶质分子由于受到极性流动相的斥力而以其疏水部分结合至固定相的非极性配基上，除此之外溶质与固定相之间不存在其他任何相互作用 亲硅醇基效应（silanophilic interaction） 一定条件下硅胶表面残余的硅醇基能与溶质发生相互作用，包括：静电作用和氢键作用，