低温保存对白血病源性树突状细胞的影响论文.docVIP

　　低温保存对白血病源性树突状细胞的影响论文 黄友章，沈建良，王立新，向丹，郑培浩，岑坚，宫立众，刘毅.freelic Dendritic Cells Derived from Leukemia Patients Abstract This study ed to investigate the influence of cryopreservation on biological properties and function of leukemic dendritic cells(LDCs) derived from patients ia. Some fresh leukemic cells mediately; some mediately; some . 12 days later, LDCs orphology, immunophenotype, mixed lymphocytic reaction (MLR) and CTL cytotoxicity on autologous leukemic cells. The results shoic cells obtained from patients ia revealed typical DC morphologically by means of using binations of cytokines in culture, but there leukemic cells ulating MLR and inducing CTL ic cells obviously. It is concluded that leukemic cells,.freelic cells, and may be used to treat MRD as immunotherapy. The induction and biological properties of LDCs are not influenced by cryopreservation. Key ic cell; dendritic cell; cryopreservation 白血病化疗后的复发率高达90％以上，即使造血干细胞移植后也有一定比例的复发，复发原因是因为存在微小残留病（MRD）。针对MRD的治疗，目前有化疗、免疫治疗等手段，其中树突状细胞（DC）介导的过继免疫治疗最具特异性和应用前景［1］，已知白血病细胞在细胞因子作用下可诱导生成DC，这种白血病源性树突状细胞(LDC)既能表达白血病抗原，又具有致敏T淋巴细胞的作用。致敏的T淋巴细胞可特异性杀灭白血病细胞。然而，在白血病初发时，由于白血病细胞多，肿瘤负荷大，免疫功能差等因素的影响，应用LDC治疗疗效差，如果在病人获完全缓解后，其体内白血病细胞已十分稀少，细胞免疫功能等也基本恢复，此时应用DC治疗MRD疗效应该明显。DC虽然可低温保存，但其功能会受到一定损伤［2］，若能在治疗前将白血病细胞先期保存，待白血病取得完全缓解时，复苏白血病细胞并诱生为DC，用自身DC进行过继免疫治疗，临床应用会十分方便，但急性、慢性髓系白血病细胞低温保存后诱生的白血病源性树突状细胞的功能如何？未见报道，本研究试图观察低温保存白血病细胞对白血病源性树突状细胞(LDC)生物学特性和功能方面的影响。 白血病细胞来源与分组 经临床、血液检查、骨髓细胞形态学、免疫学、遗传学、分子生物学标准确诊的初发髓系白血病18例(M0 1例， M1 3例， M2 2例， M3 2例， M4 3例， M5 2例， M6 2例， CML 3例），研究用骨髓25例，其中2例在培养中失败，5例患者在治疗过程中骨髓未达到完全缓解)。在肝素抗凝下抽取患者骨髓 30 ml，一部分细胞立即检测(C组)，一部分细胞立即进行LDC诱导培养(T1组)，另一部分细胞低温保存，在患者白血病完全缓解时复温细胞后进行LDC诱导培养(T2组)。采集时患者的骨髓细胞形态分类： M0、M1、M2、M3和M4的原始粒细胞、早幼粒细胞占73.25%（36%-89%），淋巴细胞占4.75%（3%-10%）；M4和M5的原始粒细胞、幼稚单核细胞占45.6%（32%-71%），淋巴细胞占2.2%（1%-3%）；M6的原始粒细胞、早幼粒细胞占27%（25%-29%），原始、早幼红占14%（13%-15%），淋巴细胞占4%；CML的原始粒细胞、早幼粒细胞占5%（4%-7%），中幼粒细胞占37.3%（20%-50%），淋巴细胞占3%（2%-4%）。 细胞保护剂、白血病细胞低温保存与复温 取二甲亚砜10 ml、羟乙基淀粉12 g、白蛋白20 g、加入RPMI 1640培养液（Gibco公司产品）内至100 ml，