第二章提取分离鉴定的方法和技术3剖析.doc

商洛职业技术学院教案 课程名称 天然药物化学 专业班级 06药学 授课教师 顾晓燕 授课类型 讲授 学 时 2 章节题目 第二节 天然药物化学成分分离、精制、鉴定的方法与技术（二） 目的 与 要求 掌握吸附色谱法、分配色谱法的分离原理、操作技术及在天然药物化学中的应用 重点 与 难点 重点:原理 难点:操作方法 方法 与手段 讲授 使用教材 及参考书 《天然药物化学》主编:吴剑锋 出版社:人民卫生出版社 《天然药物化学学习指导》主编:吴剑锋 出版社:人民卫生出版社 教 案 续 页 教 学 内 容 辅助手段 时间分配 第二节天然药物化学成分分离、精制、鉴定的方法与技术（二） 五、色谱法 （一）吸附色谱法 以固—液吸附用的最多，并有物理吸附（硅胶、氧化铝、活性炭为吸附剂进行的吸附色谱）、化学吸附（黄酮等酚酸性物质被氧化铝吸附、生物碱被酸性硅胶吸附等）及半化学吸附（聚酰胺与黄酮类、醌类等酚性化合物之间的氢键吸附，吸附力较弱，介于物理吸附与化学吸附之间）之分。物理吸附过程一般无选择性，但吸附强弱大体遵循“相似者易于吸附” 的经验规律被分离的物质与吸附剂、洗脱剂共同构成吸附层析的三要素，彼此紧密相连。常用的极性吸附剂：硅胶显微酸性，适于分离酸性和中性化合物，分离生物碱时需在流动相中加入适量的有机碱；氧化铝碱性适于分离碱性成分，不宜用于分离有机酸、酚性等酸性成分。一般认为系通过分子中的酰胺基与酚类、黄酮类化合物的酚羟基，或酰胺键上的游离胺基与醌类、脂肪酸上的羰基形成氢键缔合而产生吸附。吸附强弱取决于各种化合物与之形成氢键缔合的能力。吸附能力的强弱通常化合物在水溶剂中大致有以下规律：形成氢键的基团数目越多，则能力越强。成键位置对吸附能力也有影响。易形成分子内氢键者，其在聚酰胺上的吸附响应减弱。④分子中芳香化程度高这，则吸附性增强；反之，则减弱。一般情况下，各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱致强的大致顺序如下：水—甲醇—乙醇—氢氧化钠水溶液—甲酰胺—二甲基甲酰胺—尿素水溶液其中，最常应用的洗脱系统是：乙醇—水应用特别适合于酚类、黄酮类化合物的制备和分离。脱鞣质处理 对生物碱、萜类、甾类、糖类、氨基酸等其他极性与非极性化合物的分离也有着广泛的用途。均为极性吸附剂，故有以下特点：被分离物质极性越强，吸附力越强。强极性溶质将优先被吸附。溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质的吸附能力越强。随溶剂极性的增强，则吸附剂对溶质的吸附力将减弱。当加入极性较强的溶剂后，先前被硅胶或氧化铝所吸附的溶质可被置换而洗脱出来。常用的非极性吸附剂：活性炭。对非极性物质具有较强的亲和力，在水中对溶质表现出强的吸附能力。从活性炭上洗脱被吸附的物质时，溶剂的极性越小，洗脱能力越强。溶剂的极性可大体根据介电常数的大小来判断。介电常数越大，则极性越大。一般溶剂的介电常数按下列顺序增大： 环己烷（1.88），苯（2.29），无水乙醚（4.47），氯仿（5.20），乙酸乙酯（6.11），乙醇（26.0），甲醇（31.2），水（81.0）一般化合物的极性按下列官能团的顺序增强：—CH2—CH2—，—CH2=CH2—，—OCH3，—COOR，C=O，—CHO，—NH2，—OH，—COOH①制板 ②点样 ③展开 ④显色 ⑤测定比移值 (2)柱色谱法 具体操作如下: ①装柱 ②加样 ③洗脱 吸附柱色谱法用于物质的分离以硅胶或氧化铝为吸附剂进行柱色谱分离时（1）尽可能选用极性小的溶剂装柱和溶解样品，或用极性稍大的溶剂溶解样品后，以少量吸附剂拌匀挥干，上柱。（2）一般以TLC展开时使组分Rf值达到0.2~0.3的溶剂系统作为最佳溶剂系统进行洗脱。实践中多用混合的有机溶剂系统。（3）为避免化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱性物质宜用氧化铝作为吸附剂进行分离。通常在分离酸性（或碱性）物质时，洗脱溶剂中常加入适量的醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），以防止拖尾、使斑点集中。 一般为复合溶剂 4、被分离物质 一般在正相分配色谱中，因移动相极性较固定相极性小，故被分离物质中极性小的成分随移动相迁移速度较快。 5、操作方式 （1）纸色谱（PPC）：纸色谱的原理与液—液萃取法基本相同。原理：分配原理 支持剂：纤维素固定相：水流动相：水饱和的有机溶剂Rf值：化合物极性越小，Rf值越大；反之，化合物极性越大，Rf值越小。应用：用作微量分析，特别适合于亲水性较强的成分，其层析效果往往比吸附薄层色谱效果好。但纸层析一般需要较长的时间。①点样 ②展开 ③显色 ④测定比移值 （2）液—液分配薄层色谱法：液—液分配色谱法也可在硅胶薄层色谱上进行。因此，液—液分配柱色谱的最佳分离条件可以根据相应的薄层色谱