二十一色谱联用分析法(七版.pptVIP

第二十一章 色谱联用分析法;;色谱-质谱、波谱联用分析法;第一节 色谱－质谱联用分析法;一、气相色谱－质谱联用 ;分离试样中各组分，起着样品制备的作用 ;（二）气相色谱－质谱联用仪器 ;GC-MS对接口的一般要求是： ①能使色谱分离后的各组分尽可能多地进入质谱仪，并使载气尽可能少地进入质谱系统。②维持离子源的高真空。 ③组分在通过接口时应不发生化学变化。 ④接口对试样的有效传递应具有良好的重现性。 ⑤接口的控制操作应简单、方便、可靠。 ⑥接口应尽可能的短,以使试样尽可能快速通过接口。;GC-MS的接口有直接导入型和浓缩型 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;2．质谱单元 ;（1）离子源 ;（2）质量分析器;3．色谱单元 用于GC-MS色谱系统应该符合质谱仪的一些特殊要求。 主要是： ①固定相应选择耐高温，不易流失的固定液，最好用键合相。 ②载气应不干扰质谱检测，一般常用氦气。;（三）气相色谱－质谱分析的应用;二、高效液相色谱－质谱联用 ;（二）高效液相色谱－质谱联用仪器;离子化方式有两种： 试样在离子源中以气体形式被离子化 是从固体表面或溶液中溅射出带电离子 ;（1）电喷雾离子化接口 ;电喷雾接口示意图 ;电喷雾离子化过程示意图 ;HPLC-ESI-MS谱图主要给出准分子离子的相关信息，例如在单电荷情况下的[M+H]+、[M+Na]+、[M－H]?等，对于生物大分子如蛋白质、肽等，还能产生大量的多电荷离子。 ESI常用于强极性、热不稳定化合物及高分子化合物的测定。 ESI的主要缺点是只能允许非常小的流动相流量。;（2）大气压化学离子化接口 ;（2）质量分析器;串联四极质量分析器--使用较广泛 ;3．色谱单元 HPLC-MS中的色谱柱一般短柱，以缩短分析时间，最常用的固定相为ODS。 HPLC-MS对流动相的基本要求是不含非挥发性盐类，以防其析出堵塞毛细管等。 所用溶剂的纯度最好都是色谱纯。 流动相中挥发性电解质如甲酸、乙酸、氨水、乙酸铵等的浓度也不能太高。 流动相的pH、流速均对检测灵敏度有很大影响。;（三）高效液相色谱－质谱分析的特点和应用;2．高效液相色谱-质谱联用的应用和分析条件  液相色谱－质谱联用技术在药学、临床医学、生物学、食品化工等许多领域的应用越来越广泛。 ;HPLC-MS分析实验条件的选择： （1）流动相和流量：常用流动相为水、甲醇、乙腈及它们的混合物，可用醋酸、甲酸或它们的铵盐溶液调节pH ，应避免磷酸盐或离子对试剂等。流量对LC-MS分析有较大影响。 （2）离子检测模式：碱性物质选择正离子检测模式，可用醋酸或甲酸使试样酸化至pKa－2。酸性物质及含有较多强电负性基团的物质，选择负离子检测模式。 （3）温度：接口的干燥气体温度应高于待分析物沸点20℃左右，同时要考虑物质的热稳定性和流动相中有机溶剂的比例。;三、毛细管电泳－质谱联用;若实现毛细管电泳-ESI-质谱联用，须解决的问题： ①电压匹配问题。 ②CE是依赖电渗作为流体的动力，若与质谱联接时，质谱的高真空与CE造成的真空差，将会引起CE的电渗流的扰动，破坏分离。 ③CE的进样量小，要求MS要有很高的灵敏度。 ④CE分离工作大都是使用磷酸盐缓冲溶液来完成，与MS联用时，只能用易挥发盐的缓冲盐溶液。;四、色谱－质谱的扫描模式及 其提供的信息;（一）全扫描 全扫描是质量分析器在给定的时间范围内对给定质荷比范围进行无间断地扫描，获得样品中每一个组分（或在某一特定时刻）的全部质谱。在这种扫描模式下，可以获得各种定性和定量信息。;1．色谱－质谱三维谱 ;2.质谱 将全扫描得到的分子离子 或准分子 离子（[M+H]+、[M－H]?、[M+Na]+等）及所有碎片离子的质荷比与其对应的离子流的相对强度作图; 3.总离子流色谱图（TIC）是总离子流强度随时间（扫描次数）变化的色谱图 ;4.质量色谱图 是从计算机存储的总离子流色谱图的数据中，按质荷比调出的色谱图。 质量色谱可以鉴别某化合物或具有某基团的一组化合物的存在。 即使没有实现色谱完全分离的峰也可进行定量。;Evaluation only. Created with A