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鸦胆子不同药材及部位中鸦胆子苦醇含量分析 刘丽 摘要：建立中药鸦胆子苦醇的高效液相色谱检测方法，测定鸦胆子不同药材及同一药材不同部位中鸦胆子苦醇的含量。采用Sepax Sapphire C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），乙腈—水溶液（体积比为40:60）为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长235nm，柱温30℃。鸦胆子苦醇在质量浓度为61.6～1060 μg·mL-1呈良好的线性关系，平均回收率为100.87%，RSD为2.01%。同一药材不同部位，仁中鸦胆子苦醇最高，壳中最少；对不同药材，大药材中的鸦胆子苦醇是小药材中的2.6倍。结果表明鸦胆子同一药材不同部位及不同质量的药材中，鸦胆子苦醇含量差异比较大。 关键词：鸦胆子；鸦胆子苦醇；不同部位；HPLC 中图分类号：TS201.1 文献标识码：A 鸦胆子（Bruceajavanica(L.)Merr.），又名鸭蛋子、老鸭胆、苦参子、苦榛子等，属苦木科鸦胆子属植物，为常绿大灌木或小乔木[1]。在我国，鸦胆子主要生长在沿海热带和亚热带的福建、海南、广东、广西和云南等地。作为传统中药，性苦寒，鸦胆子具有清热解毒、止痢疾、治鸡眼等功效[2]。 鸦胆子的主要成分鸦胆子苦素、鸦胆子苦内酯、鸦胆子苦醇生物碱糖甙鸦胆子油 1仪器与材料 1.1仪器 创新通恒LC3000高效液相色谱仪（UV3000紫外检测器，P3000高压输液泵）；KH5200E超声波清洗器（超声频率40KHz,功率200w，昆山禾创）；JF1004型万分之一电子天平（余姚金诺）；小型粉碎机。 1.2材料 鸦胆子苦醇标准品（HPLC纯度不低于98%）；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；蒸馏水；鸦胆子大药材和鸦胆子小药材，购自四川成都药材市场，经四川大学生命科学学院药用天然产物实验室鉴定为植物鸦胆子的干燥果实。大药材圆润饱满，小药材颗粒较小且仁少。 2方法和结果 2.1 色谱条件 Sepax Sapphire C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈—水溶液（体积比为40:60）；流速1.0mL·min-1；检测波长235nm；柱温30℃；理论塔板数不低于5000。按上述色谱条件，分别精密吸鸦胆子苦醇取供试品及对照品溶液，进样检测。两者在相应位置，有相同保留时间的色谱峰。鸦胆子苦醇的高效液相色图见图1。 图1对照品HPLC图 注：1：鸦胆子苦醇 Fig.1 HPLC chromatograms of reference substance Note:1:brusatol 2.2对照品溶液的制备 精密称取鸦胆子苦醇对照品，于10mL容量瓶中加甲醇溶解完全并定容至刻度线，得到对照品溶液。精密吸取对照品溶液，加甲醇分别稀释成溶度为1060、636、308、154、61.6μg·mL-1。 2.3供试品溶液的制备 鸦胆子大药材壳、仁分离，将鸦胆子大药材壳、鸦胆子大药材、鸦胆子大药材仁、鸦胆子小药材碾碎。分别称取四种药材各5.0012g于100mL锥形瓶，加入20mL甲醇，称定质量。常温放置过夜后超声30min，静置后再称定质量，加甲醇补足减少部分并摇匀。经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试样品。 2.4 标准曲线的绘制 精密吸取质量浓度为1060、636、308、154、61.6μg·mL-1对照品溶液各10μL，按“2.1”色谱条件进样检测。以对照品浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线[11]。结果表明，鸦胆子苦醇在质量浓度为61.6～1060 μg·mL-1之间与峰面积有良好的线性关系，得到的回归方程为Y=10796X-16952（r=0.9994，n=5）。 2.5 精密度试验 吸取同一苦醇对照品溶液10μL，按“2.1”色谱条件重复进样5次，结果显示峰面积RSD为1.4%，表明仪器精密度良好。 2.6 重复性试验 按“2.3”供试品溶液制备的方法，同时制备三份质量浓度相同的鸦胆子大药材仁供试品溶液，在“2.1”色谱条件下，RSD为2.5%，表明该方法重复性良好。 2.7 稳定性试验 精确吸取“2.3”鸦胆子大药材仁供试样品15μL，按“2.1”色谱条件，分别在制备后0、4、8、12、24后小时进样检测，峰面积RSD为0.4%，表明样品在24h内基本稳定。 2.8 加样回收率试验 精密称取3.1056g已知含量的鸦胆子大药材仁，按“2.3”供试品制备方法得到样品溶液。称190μg鸦胆子对照品，于10mL容量瓶中定容。取5份2mL样品溶液，分别加入0.5mL对照品溶液，按“2.1”色谱条件，各吸取10 μL进样检测[12]，平均回收率为101.00%，RSD为2.16%。 2.9 样品的检测 按“2.3”供试样品制备方法，得到鸦胆子